【摘 要】
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目的 制备Tenascin-R(TN-R)蛋白的EGF-L功能片段及该片段抗血清,联合TN-R蛋白研究其在体外对大鼠皮层神经元的作用,探讨该功能片段抗血清用于治疗中枢神经系统(CNS)损伤后轴
【机 构】
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南方医科大学珠江医院神经外科,北京军区总医院八一脑科医院神经外科
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目的 制备Tenascin-R(TN-R)蛋白的EGF-L功能片段及该片段抗血清,联合TN-R蛋白研究其在体外对大鼠皮层神经元的作用,探讨该功能片段抗血清用于治疗中枢神经系统(CNS)损伤后轴突再生的可行性. 方法 制备人TN-R蛋白EGF-L片段抗血清,再以该抗血清联合TN-R蛋白包被多孔板形成不同的铺板状态,分EGF-L抗血清组、TN-R蛋白组、TN-R蛋白+EGF-L抗血清组,仅包被有多聚赖氨酸(PLL)处为对照组.单细胞悬液法原代培养大鼠皮层神经元24h后免疫荧光染色检测β-Ⅲ-tubulin,比较不同的铺板状态下所黏附的细胞数；7d后免疫荧光染色检测β-Ⅲ-tubulin,观察神经元的形态并比较神经元突起主干、分支点数量及突起总长度.小组织块法培养大鼠皮层神经元7d后观察包被的蛋白与PLL之间形成的边界对神经元突起生长的影响. 结果 成功制备高浓度的TN-R蛋白EGF-L片段抗血清.4组所黏附的细胞密度不同,比较差异有统计学意义(P＜0.05).与EGF-L抗血清组和对照组比较,TN-R蛋白组所黏附的细胞密度、神经元的突起主干、分支点数量及突起总长度较低,TN-R蛋白+EGF-L抗血清组上述指标均较高,差异有统计学意义(P＜0.05); TN-R蛋白组从组织块中迁徙出的细胞及细胞突起均几乎不能越过边界,TN-R蛋白+ EGF-L抗血清组可见有少量的细胞突起越过边界生长. 结论 TN-R蛋白EGF-L片段抗血清在体外能削弱TN-R蛋白对于神经元生长的抑制功能,有望将该抗血清用于体内,为CNS损伤后轴突再生创造有利的内环境.
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