【摘 要】
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[目的]拟构建并鉴定抗环胍氨酸肽(cyclic citrullinated peptide,CCP)单链片段V(Single chainFragment V,ScFv)噬菌体抗体库,为进一步可溶性表达和检测类风湿性关节炎(RA)关
【机 构】
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内蒙古医科大学附属医院风湿免疫科,内蒙古 呼和浩特,010059
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[目的]拟构建并鉴定抗环胍氨酸肽(cyclic citrullinated peptide,CCP)单链片段V(Single chainFragment V,ScFv)噬菌体抗体库,为进一步可溶性表达和检测类风湿性关节炎(RA)关节滑膜的CCP表达情况,揭示CCP及其抗体在RA发病中作用奠定基础.[方法]①分离抗CCP抗体阳性患者外周血单个核细胞,提取mRNA并反转录cDNA.扩增免疫球蛋白重链可变区(VH)和轻链可变区(VL).通过重叠聚合酶链反应(PCR)用连接片段将VH和Vκ/Vλ体外连接成单链抗体基因;SfiⅠ和Not Ⅰ酶切并与噬菌粒pHEN2连接;将pHEN2 ScFv电转至感受态大肠杆菌TG1,建立抗CCP-ScFv噬菌体抗体库;②检测抗CCP-ScFv pHEN2噬菌体的库容、插入效率;[结果]抗CCP-ScFv噬菌体抗体库库容8.76×108 CFU cfu/mL,插入频率83.3％;插入率83.33％.所插入DNA片断约1180 bp.MSP Ⅰ酶切指纹图谱鉴定也显示多样性.[结论]所构建抗环胍氨酸肽单链噬菌体抗体库库容可满足进一步可溶性表达的要求.
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