【摘 要】
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目的 建立1种双色荧光示踪鸡胚脊髓两侧连合纤维投射的实验方法.方法 鸡胚孵育至胚龄2.5～3d,通过鸡胚活体原位电转基因技术将携带有报告基因绿色荧光蛋白(GFP)的质粒(pCAGGS-G
【机 构】
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新乡医学院生命科学技术学院,河南新乡,453003;新乡医学院生命科学技术学院,河南新乡453003;河南省医用组织再生重点实验室,河南新乡453003
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目的 建立1种双色荧光示踪鸡胚脊髓两侧连合纤维投射的实验方法.方法 鸡胚孵育至胚龄2.5～3d,通过鸡胚活体原位电转基因技术将携带有报告基因绿色荧光蛋白(GFP)的质粒(pCAGGS-GFP)准确注射到鸡胚脊髓腔,实现定时、定位活体电转基因.转染后继续孵育至6d,取GFP阳性表达的胚胎,部分做脊髓横向切片,部分利用open-book技术将脊髓展开观察连合纤维的发育情况,每组至少取3个标本.其后在脊髓非转染侧连合神经元所在之处,点状注射DiI乙醇溶液,封片后于4℃避光孵育3d,在荧光显微镜下观察脊髓连合纤维投射情况.结果 脊髓横切及open-book结果显示,鸡胚脊髓GFP阳性转染侧的神经元轴突穿过底板投射到脊髓对侧;同时在open-book结果中还可观察到,转染侧轴突穿过底板后分别沿腹索和外侧索向头尾部投射;DiI标记的非转染侧连合神经元轴突也同样穿过底板投射到对侧,并在侧索白质内延伸.结论 本实验成功建立了1种双色荧光示踪鸡胚脊髓两侧连合纤维投射的研究方法,为研究脊髓神经发育提供技术保障.
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