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【摘要】目的：本文以新疆产瓦松作为研究对象，采用比色法，测定瓦松有效成分总三萜的含量。方法：以齐墩果酸作为对照品，以5%香草醛-冰醋酸、高氯酸作为显色剂，在540nm波长处处测定样品吸收度。结果：齐墩果酸在4～16μg／ml线性范围内，线性关系良好，其回归方程为：A=0.1082C+0.1105，r=0.9981，所测瓦松中总三萜成分为1.51％,RSD=1.31%。
【关键词】瓦松;总三萜;比色法
【中图分类号】R284.2【文献标识码】A【文章编号】1007-8517(2009)10-0011-01
黄花瓦松(Orostachys spinosa (L.) C.A. Mey.)为景天科瓦松属(Orostachys)二年生肉质草本植物，又名昨叶荷草、向天草，为我国传统用药[1]。其性味酸、苦、凉（《唐本草》等），归肝、肺、脾经（《本草再新》），具有清热解毒、凉血止血、利湿消肿、抗菌消炎等功效，中国药典(2005年版)对其进行了收录。瓦松属植物全世界约有13种，主要分布于温带地区，我国约有10种，在新疆也有着广泛的分布（新疆药用植物志第三册）。经研究表明，萜类化合物是其主要有效化学成分之一。为了更好地利用和开发其药用成分，本实验以齐墩果酸为对照，采用5%香草醛-冰醋酸、高氯酸显色的方法，首次对瓦松中总三萜类成分的含量进行测定，为其进一步开发利用提供了可靠的鉴定依据。
1试药及仪器
试药：所用试剂均为国产分析纯，黄花瓦松采自新疆农九师165团。齐墩果酸对照品购于武汉卓康科技发展有限公司。仪器：水浴锅（SB-1000上海爱明仪器有限公司）、分光光度计（722N型上海精密科学仪器有限公司）
2方法[2~5]及结果
2.1对照液的制备精确称取齐墩果酸对照品20mg，置于100ml容量瓶中。加甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，备用。
2.2测定波长的选择将齐墩果酸对照品加显色剂后，于分光光度计上扫描，得吸收光谱图，结果如图1，齐墩果酸在540nm处有一吸收峰，故确定540nm为测定波长。
2.3显色剂用量及条件选择
2.3.15％香草醛-冰醋酸溶液用量的选择取齐墩果酸对照品溶液1.0ml5份，水浴挥干，分别加入5%香草醛-冰醋酸溶液0.2、0.3、0.4、0.5、0.6ml，各加入高氯酸1.4ml，置70水浴加热15min，冰浴冷却后，转移至10ml容量瓶中加乙酸乙酯稀释至刻度。摇匀，在540nm波长处测定吸收值，结果见表1。结果表明5%香草醛-冰醋酸用量为0.4ml时最佳。
2.3.2高氯酸的用量的选择取齐墩果酸对照品溶液1.0ml5份，水浴挥干，分别加入5%香草醛-冰醋酸溶液0.5ml，高氯酸1.0、1.2、1.4、1.6、1.8ml，置70℃水浴加热15 min，冰浴冷却后，转移至10ml容量瓶中加乙酸乙酯稀释至刻度。摇匀，在540nm波长处测定吸收值，结果见表2。结果表明，高氯酸用量为1.6ml时最佳。
2.4对照曲线的制备精确吸取对照液0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8ml，分别置具塞试管中，挥去溶剂，准确加入5%香草醛-冰醋酸0.4ml、高氯酸1.6ml，混匀，置7O℃恒温水浴中加热15min，冷却至室温，并转移至10ml容量瓶中加乙酸乙酯稀释至刻度，摇匀，在540nm波长处测定吸收度，以不加对照品溶液而直接加5%香草醛-冰醋酸0.4ml，高氯酸1.6ml，用乙酸乙酯稀释至刻度的混合溶液为空白对照，并以A对浓度C回归得方程：A=0.1082C + 0.1105，r =0.9981，线性范围在4～16μg/ml。
2.5供试品溶液的置备精确称取瓦松25mg。置25ml容量瓶中。加乙醚15ml。超声提取3O分钟，再添加乙醚至刻度。精密吸取15.0ml，置于25ml容量瓶内，挥干溶剂，加甲醇稀释至刻度，摇匀。
2.6含量测定方法精确称取供试液溶液3ml，加入10ml容量瓶内，挥干溶剂，加乙酸乙酯至刻度，再从中精密吸取4ml溶液加入10ml容量瓶内，挥干溶剂后，加入5%香草醛-冰醋酸0.4ml、高氯酸1.6 ml，混匀，并由乙酸乙酯稀释至刻度，按样品测定项下操作。代入标准曲线方程，计算含量。结果表明总三萜类成分含量为1.51%(n=5)，RSD=1.31%。2.7稳定性试验同一份样品按上述方法处理，在1日之内，隔1h测定，共测6次，得平均含量为1.50，RSD为1.58%，结果说明显色反应在6h基本稳定。
2.8加样回收率试验精密称取已知含量的瓦松粉末0.2g，6份，精密加入齐墩果酸对照品1mg，照供试品溶液制备方法制成10ml样品液，各吸取0.1ml，依法显色后测定吸收度，见表3，计算回收率，得平均回收率为98.718%，RSD=0.8644%。
3讨论
三萜类化合物为药用植物中主要的有效化学成份之一，对药用植物黄花瓦松中总三萜成分的测定未见文献报道，本文所得结果表明黄花瓦松中三萜类成分含量较高，作为我国的传统用药，可对其进行更深入的研究与开发。比色法是测定三萜类化合物常用方法，本文探讨了显色条件以及反应后放置时间对含量测定的影响，结果表明，香草醛-冰醋酸溶液以及高氯酸用量等因素的影响较为显著，反应后的放置时间在6h内基本稳定，此方法简单可行，
其结果较稳定，重现性好，为测量瓦松中活性成分总三萜类成分提供了一种有效可靠的分析方法。
参考文献
[1] 傅书遐,傅坤俊.中国植物志[J].北京:科学出版社,1984
[2]帕丽达,堵年生.比色法测定琐琐葡萄中三萜类成分的含量[J].天津药学，2002,14(4):70
[3]陈明珠.齐墩果酸片的比色测定[J].中草药，1981,12(9):13
[4]余志坚,包水明,李荣同.比色法测定菌核侧耳中三萜类成分的含量[J].时珍国医国药，2006,6(l7):911
[5]舒任庚,刘玉凤,舒积成.比色法测定青钱柳中三萜类成分的含量[J].中国现代应用药学杂志，2006,23(5):406-408
(收稿日期：2009.03.14)
【关键词】瓦松;总三萜;比色法
【中图分类号】R284.2【文献标识码】A【文章编号】1007-8517(2009)10-0011-01
黄花瓦松(Orostachys spinosa (L.) C.A. Mey.)为景天科瓦松属(Orostachys)二年生肉质草本植物，又名昨叶荷草、向天草，为我国传统用药[1]。其性味酸、苦、凉（《唐本草》等），归肝、肺、脾经（《本草再新》），具有清热解毒、凉血止血、利湿消肿、抗菌消炎等功效，中国药典(2005年版)对其进行了收录。瓦松属植物全世界约有13种，主要分布于温带地区，我国约有10种，在新疆也有着广泛的分布（新疆药用植物志第三册）。经研究表明，萜类化合物是其主要有效化学成分之一。为了更好地利用和开发其药用成分，本实验以齐墩果酸为对照，采用5%香草醛-冰醋酸、高氯酸显色的方法，首次对瓦松中总三萜类成分的含量进行测定，为其进一步开发利用提供了可靠的鉴定依据。
1试药及仪器
试药：所用试剂均为国产分析纯，黄花瓦松采自新疆农九师165团。齐墩果酸对照品购于武汉卓康科技发展有限公司。仪器：水浴锅（SB-1000上海爱明仪器有限公司）、分光光度计（722N型上海精密科学仪器有限公司）
2方法[2~5]及结果
2.1对照液的制备精确称取齐墩果酸对照品20mg，置于100ml容量瓶中。加甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，备用。
2.2测定波长的选择将齐墩果酸对照品加显色剂后，于分光光度计上扫描，得吸收光谱图，结果如图1，齐墩果酸在540nm处有一吸收峰，故确定540nm为测定波长。
2.3显色剂用量及条件选择
2.3.15％香草醛-冰醋酸溶液用量的选择取齐墩果酸对照品溶液1.0ml5份，水浴挥干，分别加入5%香草醛-冰醋酸溶液0.2、0.3、0.4、0.5、0.6ml，各加入高氯酸1.4ml，置70水浴加热15min，冰浴冷却后，转移至10ml容量瓶中加乙酸乙酯稀释至刻度。摇匀，在540nm波长处测定吸收值，结果见表1。结果表明5%香草醛-冰醋酸用量为0.4ml时最佳。
2.3.2高氯酸的用量的选择取齐墩果酸对照品溶液1.0ml5份，水浴挥干，分别加入5%香草醛-冰醋酸溶液0.5ml，高氯酸1.0、1.2、1.4、1.6、1.8ml，置70℃水浴加热15 min，冰浴冷却后，转移至10ml容量瓶中加乙酸乙酯稀释至刻度。摇匀，在540nm波长处测定吸收值，结果见表2。结果表明，高氯酸用量为1.6ml时最佳。
2.4对照曲线的制备精确吸取对照液0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8ml，分别置具塞试管中，挥去溶剂，准确加入5%香草醛-冰醋酸0.4ml、高氯酸1.6ml，混匀，置7O℃恒温水浴中加热15min，冷却至室温，并转移至10ml容量瓶中加乙酸乙酯稀释至刻度，摇匀，在540nm波长处测定吸收度，以不加对照品溶液而直接加5%香草醛-冰醋酸0.4ml，高氯酸1.6ml，用乙酸乙酯稀释至刻度的混合溶液为空白对照，并以A对浓度C回归得方程：A=0.1082C + 0.1105，r =0.9981，线性范围在4～16μg/ml。
2.5供试品溶液的置备精确称取瓦松25mg。置25ml容量瓶中。加乙醚15ml。超声提取3O分钟，再添加乙醚至刻度。精密吸取15.0ml，置于25ml容量瓶内，挥干溶剂，加甲醇稀释至刻度，摇匀。
2.6含量测定方法精确称取供试液溶液3ml，加入10ml容量瓶内，挥干溶剂，加乙酸乙酯至刻度，再从中精密吸取4ml溶液加入10ml容量瓶内，挥干溶剂后，加入5%香草醛-冰醋酸0.4ml、高氯酸1.6 ml，混匀，并由乙酸乙酯稀释至刻度，按样品测定项下操作。代入标准曲线方程，计算含量。结果表明总三萜类成分含量为1.51%(n=5)，RSD=1.31%。2.7稳定性试验同一份样品按上述方法处理，在1日之内，隔1h测定，共测6次，得平均含量为1.50，RSD为1.58%，结果说明显色反应在6h基本稳定。
2.8加样回收率试验精密称取已知含量的瓦松粉末0.2g，6份，精密加入齐墩果酸对照品1mg，照供试品溶液制备方法制成10ml样品液，各吸取0.1ml，依法显色后测定吸收度，见表3，计算回收率，得平均回收率为98.718%，RSD=0.8644%。
3讨论
三萜类化合物为药用植物中主要的有效化学成份之一，对药用植物黄花瓦松中总三萜成分的测定未见文献报道，本文所得结果表明黄花瓦松中三萜类成分含量较高，作为我国的传统用药，可对其进行更深入的研究与开发。比色法是测定三萜类化合物常用方法，本文探讨了显色条件以及反应后放置时间对含量测定的影响，结果表明，香草醛-冰醋酸溶液以及高氯酸用量等因素的影响较为显著，反应后的放置时间在6h内基本稳定，此方法简单可行，
其结果较稳定，重现性好，为测量瓦松中活性成分总三萜类成分提供了一种有效可靠的分析方法。
参考文献
[1] 傅书遐,傅坤俊.中国植物志[J].北京:科学出版社,1984
[2]帕丽达,堵年生.比色法测定琐琐葡萄中三萜类成分的含量[J].天津药学，2002,14(4):70
[3]陈明珠.齐墩果酸片的比色测定[J].中草药，1981,12(9):13
[4]余志坚,包水明,李荣同.比色法测定菌核侧耳中三萜类成分的含量[J].时珍国医国药，2006,6(l7):911
[5]舒任庚,刘玉凤,舒积成.比色法测定青钱柳中三萜类成分的含量[J].中国现代应用药学杂志，2006,23(5):406-408
(收稿日期：2009.03.14)