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【摘 要】目的：探讨survivin， VEGF和PCNA在人脑胶质瘤中的表达及意义。方法：应用免疫组化SP法检测42例胶质瘤和15例正常脑组织标本中survivin， VEGF和PCNA蛋白的表达。结果：survivin， VEGF和PCNA蛋白在正常脑组织中均无表达，三者在脑胶质瘤中的阳性率分别为54.76%（23/42）、57.14%（24/42）、61.90%（26/42），脑胶质瘤中的表达率均显著高于正常脑组织（p<0.01）；胶质瘤中三者表达呈直线趋势，两两相关。结论：survivin， VEGF和PCNA蛋白表达与脑胶质瘤的发生、发展有关；在胶质瘤的发生、发展过程中可能存在VEGF， survivin和PCNA因子调控通路。联合检测脑胶质瘤中survivin， VEGF和PCNA蛋白表达，可能进一步阐明胶质瘤的发生发展机制，更有利于对脑胶质瘤的恶性生物学行为进行评价和判断，还可能为胶质瘤的手术治疗、靶向治疗及临床评预后评价提供新思路。
【关键词】胶质瘤；survivin；VEGF；PCNA
【中图分类号】R322.81 【文献标识码】A 【文章编号】1004—7484（2013）11—0012—01
1材料與方法
1.1组织标本：标本选自于2005年3月-20013年7月在唐河县人民医院神经外科神经外科住院手术治疗，并经病理诊断为胶质瘤，病理科保存完好的石蜡包埋的标本。共42例患者。
1.2实验方法：免疫组化的实验步骤按链霉菌抗生物素蛋白—过氧化物酶连接（SP）法说明书进行。即用型兔抗人survivin、VEGF、PCNA、多克隆抗体（一抗）均购自北京博奥森生物技术有限公司。用已知阳性的组织做阳性对照，用PBS代替一抗作阴性对照，以除外假阳性结果。
1.3结果判定：survivin蛋白阳性细胞为细胞浆或细胞核中出现淡黄色，棕黄色或棕褐色的颗粒，VEGF蛋白阳性细胞为细胞浆中出现淡黄色，棕黄色或棕褐色的颗粒，PCNA定位于细胞核，肿瘤细胞呈棕褐色为阳性。每例切片在400倍视野下随机选取最高密度区域的5个不重复视野，每个视野计数200个细胞共1000个细胞，分别计数每个视野细胞总数（N）及阳性染色细胞数（n），求出每例标本的阳性指数（LI）。根据肿瘤细胞数量，阳性程度分级：survivin阳性细胞数≤4%为阴性（-），5%-25%为弱阳性（+），26%-50%为阳性（++），≥50%为强阳性（+++）；VEGF阳性细胞数≤1%为阴性（-），1%-10%为弱阳性（+），11%-30%为阳性（++），≥31%为强阳性（+++）[1]。PCNA分级同survivin。
1.4统计学处理：研究资料采用Excel 2003建数据库，结果以平均数±标准差表示，采用SPSS15.0统计软件包进行统计学处理，选择精确模块：两组间阳性率的比较采用卡方检验；两组间阳性指数（LI）均值的比较采用t检验；两因素间的相关关系分析采用直线相关。取α<0.05，差异有统计学意义，α<0.01差异有显著统计学意义。
2结果：
2.1 survivin蛋白中的表达：正常脑组织中survivin蛋白无表达；42例胶质瘤组织中，23例表达阳性，阳性率为54.76%；脑胶质瘤中的表达率高于正常脑组织（p<0.01）。在23例Ⅰ、Ⅱ级胶质瘤标本中阴性14例、弱阳性4例、阳性4例、强阳性1例，阳性率为39.13%（9/23），LI值为（9.52±14.37）%，在19例Ⅲ、Ⅳ级胶质瘤标本中阴性5例、弱阳性3例、阳性7例、强阳性4例，阳性率为73.68%（14/19），LI值为（26.11±22.16）%，低度恶性（WHOⅠ+Ⅱ）组胶质瘤阳性指数均值低于高度恶性（WHOⅢ+Ⅳ）组。
2.2 VEGF蛋白的表达：正常脑组织中VEGF蛋白无表达；42例胶质瘤组织中，24例表达阳性，阳性率为57.14%；在脑胶质瘤中的表达率高于正常脑组织（p<0.01）。在23例Ⅰ、Ⅱ级胶质瘤标本中阴性13例、弱阳性5例、阳性4例、强阳性1例，阳性率为43.48%（10/23），LI值为（5.87±9.14）%，在19例Ⅲ、Ⅳ级胶质瘤标本中阴性5例、弱阳性3例、阳性5例、强阳性6例，阳性率为73.68%（14/19），LI值为（16.89±15.94）%，低度恶性（WHOⅠ+Ⅱ）组胶质瘤的表达率和阳性指数均值低于高度恶性（WHOⅢ+Ⅳ）组。
2.3 PCNA蛋白的表达：正常脑组织中PCNA蛋白无表达；42例胶质瘤组织中，26例表达阳性，阳性率为61.90%；在脑胶质瘤中的表达率高于正常脑组织（p<0.01）。在23例Ⅰ、Ⅱ级胶质瘤标本中阴性12例、弱阳性5例、阳性4例、强阳性2例，阳性表达率为47.83%（11/23），LI值为（14.74±16.68）%，在19例Ⅲ、Ⅳ级胶质瘤标本中阴性4例、弱阳性3例、阳性5例、强阳性7例，阳性率为78.95%（15/19），LI值为（35.21±24.51）%，低度恶性胶质瘤组（WHOⅠ+Ⅱ）PCNA蛋白的表达率和阳性指数均值低于高度恶性胶质瘤组（WHOⅢ+Ⅳ）。
2.7 分析三者之间的两两相关性：绘制三维散点图显示三者之间的两两相关性：survivin与VEGF蛋白的表达呈显著正相关（r=0.875，p<0.01）；survivin与PCNA蛋白的表达呈显著正相关（r=0.826，p<0.01）；VEGF与PCNA蛋白的表达呈显著正相关（r=0.858，p<0.01）。
3 讨论
本组实验资料中survivin， VEGF和PCNA蛋白表达之间呈显著正相关关系，提示三者的蛋白表达具有一致性以及三者在胶质瘤的发生中起着协调作用，它们共同参与了胶质瘤的发生发展，共同为肿瘤的浸润生长创造有利的生存内环境；通过以上的分析，我们还认为：在胶质瘤的发生、发展过程中可能存在VEGF， survivin和PCNA因子调控通路，在某种始动因素的作用下，细胞出现恶变倾向，随着细胞的分化增殖，原有血管不足以满足肿瘤细胞的需要，局部处于相对缺血缺氧状态，诱导VEGF表达，VEGF可上调survivin的表达，抑制血管内皮细胞凋亡，促进其增殖，从而促进新生血管的生成，利于不断地摄取氧和营养物质并排除代谢产物；同时survivin蛋白通过竞争性地与周期蛋白（Cyclin）和周期蛋白依赖性蛋白激酶（CDK）的复合物（主要为Cyclin D—CDK4）结合，解除了对PCNA的抑制，通过增强DNA多聚酶6的活性，参与DNA的复制、合成、细胞的增殖分裂，即细胞分化增殖，将会继续导致局部处于相对缺血缺氧和上述循环。
联合检测脑胶质瘤中survivin， VEGF和PCNA蛋白表达，可能进一步阐明胶质瘤的发生发展机制，更有利于对人脑胶质瘤的恶性生物学行为进行评价和判断，还可能为胶质瘤的手术治疗、临床评预后价及靶向治疗提供新的思路。
参考文献：
[1] 许良中，杨文涛。免疫组织化学反应结果的判断标准[J]。中国癌症杂志，1996，6：229-231。
【关键词】胶质瘤；survivin；VEGF；PCNA
【中图分类号】R322.81 【文献标识码】A 【文章编号】1004—7484（2013）11—0012—01
1材料與方法
1.1组织标本：标本选自于2005年3月-20013年7月在唐河县人民医院神经外科神经外科住院手术治疗，并经病理诊断为胶质瘤，病理科保存完好的石蜡包埋的标本。共42例患者。
1.2实验方法：免疫组化的实验步骤按链霉菌抗生物素蛋白—过氧化物酶连接（SP）法说明书进行。即用型兔抗人survivin、VEGF、PCNA、多克隆抗体（一抗）均购自北京博奥森生物技术有限公司。用已知阳性的组织做阳性对照，用PBS代替一抗作阴性对照，以除外假阳性结果。
1.3结果判定：survivin蛋白阳性细胞为细胞浆或细胞核中出现淡黄色，棕黄色或棕褐色的颗粒，VEGF蛋白阳性细胞为细胞浆中出现淡黄色，棕黄色或棕褐色的颗粒，PCNA定位于细胞核，肿瘤细胞呈棕褐色为阳性。每例切片在400倍视野下随机选取最高密度区域的5个不重复视野，每个视野计数200个细胞共1000个细胞，分别计数每个视野细胞总数（N）及阳性染色细胞数（n），求出每例标本的阳性指数（LI）。根据肿瘤细胞数量，阳性程度分级：survivin阳性细胞数≤4%为阴性（-），5%-25%为弱阳性（+），26%-50%为阳性（++），≥50%为强阳性（+++）；VEGF阳性细胞数≤1%为阴性（-），1%-10%为弱阳性（+），11%-30%为阳性（++），≥31%为强阳性（+++）[1]。PCNA分级同survivin。
1.4统计学处理：研究资料采用Excel 2003建数据库，结果以平均数±标准差表示，采用SPSS15.0统计软件包进行统计学处理，选择精确模块：两组间阳性率的比较采用卡方检验；两组间阳性指数（LI）均值的比较采用t检验；两因素间的相关关系分析采用直线相关。取α<0.05，差异有统计学意义，α<0.01差异有显著统计学意义。
2结果：
2.1 survivin蛋白中的表达：正常脑组织中survivin蛋白无表达；42例胶质瘤组织中，23例表达阳性，阳性率为54.76%；脑胶质瘤中的表达率高于正常脑组织（p<0.01）。在23例Ⅰ、Ⅱ级胶质瘤标本中阴性14例、弱阳性4例、阳性4例、强阳性1例，阳性率为39.13%（9/23），LI值为（9.52±14.37）%，在19例Ⅲ、Ⅳ级胶质瘤标本中阴性5例、弱阳性3例、阳性7例、强阳性4例，阳性率为73.68%（14/19），LI值为（26.11±22.16）%，低度恶性（WHOⅠ+Ⅱ）组胶质瘤阳性指数均值低于高度恶性（WHOⅢ+Ⅳ）组。
2.2 VEGF蛋白的表达：正常脑组织中VEGF蛋白无表达；42例胶质瘤组织中，24例表达阳性，阳性率为57.14%；在脑胶质瘤中的表达率高于正常脑组织（p<0.01）。在23例Ⅰ、Ⅱ级胶质瘤标本中阴性13例、弱阳性5例、阳性4例、强阳性1例，阳性率为43.48%（10/23），LI值为（5.87±9.14）%，在19例Ⅲ、Ⅳ级胶质瘤标本中阴性5例、弱阳性3例、阳性5例、强阳性6例，阳性率为73.68%（14/19），LI值为（16.89±15.94）%，低度恶性（WHOⅠ+Ⅱ）组胶质瘤的表达率和阳性指数均值低于高度恶性（WHOⅢ+Ⅳ）组。
2.3 PCNA蛋白的表达：正常脑组织中PCNA蛋白无表达；42例胶质瘤组织中，26例表达阳性，阳性率为61.90%；在脑胶质瘤中的表达率高于正常脑组织（p<0.01）。在23例Ⅰ、Ⅱ级胶质瘤标本中阴性12例、弱阳性5例、阳性4例、强阳性2例，阳性表达率为47.83%（11/23），LI值为（14.74±16.68）%，在19例Ⅲ、Ⅳ级胶质瘤标本中阴性4例、弱阳性3例、阳性5例、强阳性7例，阳性率为78.95%（15/19），LI值为（35.21±24.51）%，低度恶性胶质瘤组（WHOⅠ+Ⅱ）PCNA蛋白的表达率和阳性指数均值低于高度恶性胶质瘤组（WHOⅢ+Ⅳ）。
2.7 分析三者之间的两两相关性：绘制三维散点图显示三者之间的两两相关性：survivin与VEGF蛋白的表达呈显著正相关（r=0.875，p<0.01）；survivin与PCNA蛋白的表达呈显著正相关（r=0.826，p<0.01）；VEGF与PCNA蛋白的表达呈显著正相关（r=0.858，p<0.01）。
3 讨论
本组实验资料中survivin， VEGF和PCNA蛋白表达之间呈显著正相关关系，提示三者的蛋白表达具有一致性以及三者在胶质瘤的发生中起着协调作用，它们共同参与了胶质瘤的发生发展，共同为肿瘤的浸润生长创造有利的生存内环境；通过以上的分析，我们还认为：在胶质瘤的发生、发展过程中可能存在VEGF， survivin和PCNA因子调控通路，在某种始动因素的作用下，细胞出现恶变倾向，随着细胞的分化增殖，原有血管不足以满足肿瘤细胞的需要，局部处于相对缺血缺氧状态，诱导VEGF表达，VEGF可上调survivin的表达，抑制血管内皮细胞凋亡，促进其增殖，从而促进新生血管的生成，利于不断地摄取氧和营养物质并排除代谢产物；同时survivin蛋白通过竞争性地与周期蛋白（Cyclin）和周期蛋白依赖性蛋白激酶（CDK）的复合物（主要为Cyclin D—CDK4）结合，解除了对PCNA的抑制，通过增强DNA多聚酶6的活性，参与DNA的复制、合成、细胞的增殖分裂，即细胞分化增殖，将会继续导致局部处于相对缺血缺氧和上述循环。
联合检测脑胶质瘤中survivin， VEGF和PCNA蛋白表达，可能进一步阐明胶质瘤的发生发展机制，更有利于对人脑胶质瘤的恶性生物学行为进行评价和判断，还可能为胶质瘤的手术治疗、临床评预后价及靶向治疗提供新的思路。
参考文献：
[1] 许良中，杨文涛。免疫组织化学反应结果的判断标准[J]。中国癌症杂志，1996，6：229-231。