【摘 要】
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对转基因株系的PCR检测以及对T-DNA侧翼基因组序列的深入分析,可以充分了解转基因株系的特异性分子特征.本研究利用农杆菌(Agrobacterium)介导的大豆(Glycine max)子叶转化方
【机 构】
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浙江省农业科学院作物与核技术利用研究所,杭州310021长江大学园艺园林学院,荆州434025;浙江师范大学化学与生命科学学院,金华321004;
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对转基因株系的PCR检测以及对T-DNA侧翼基因组序列的深入分析,可以充分了解转基因株系的特异性分子特征.本研究利用农杆菌(Agrobacterium)介导的大豆(Glycine max)子叶转化方法,获得了3个转GmWRKY70基因的大豆株系.本研究对除草剂抗性基因(bialaphos resistance,Bar)、目标基因GmWRKY70以及载体构建特异性片段进行PCR检测,利用高效热不对称交错PCR(high-efficient thermal asymmetric interlaced PCR,Hi-TAIL PCR)对T-DNA侧翼序列进行整合位点分析.结果表明,3个转GmWRKY70基因的大豆株系均为阳性株系.T-DNA在43119699～43119712 bp之间反向整合到大豆染色体Chr07中.T-DNA整合导致大豆染色体Chr07插入位点12 bp缺失.对于引入的T-DNA,发现左边界(left border,LB)的80 bp序列和右边界(right border,RB)的22 bp序列被截短.在导入的LB端和大豆基因组DNA的整合位点上发现了两个碱基对的微同源性,而RB未发现同源性.本研究设计新的整合位点特异性引物,并验证这种转化事件,为促进分子辅助选择在育种计划中的应用提供了资料基础.
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