人脑源性神经营养因子重组腺病毒载体转染大鼠骨髓间质干细胞的研究

来源 :中华实验外科杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:Stanleytsang627
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目的 探讨增强型绿色荧光蛋白( EGFP)为报告基因、人脑源性神经营养因子(hBDNF)为目的基因的重组腺病毒载体Ad5-hBDNF-EGFP体外转染大鼠骨髓间质干细胞(rMSCs)的特点,从基因转录及蛋白表达水平检测hBDNF基因在体外rMSCs中的表达。方法 分离、培养rMSCs,流式细胞仪检测CD34、CD45、CD29、CD90的表达,腺病毒体外转染第3代rMSCs,荧光显微镜下观察绿色荧光信号,流式细胞仪检测转染率,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot法检测hBDNF mRNA和hBDNF蛋白的表达。结果 CD34、CD45、CD29、CD90阳性细胞比率分别为0.8%、6.8%、98.9%、99.9%。腺病毒转染rMSCs后可见绿色荧光信号,强度随腺病毒感染复数(MOI)的增加而增强;MOI为10、20、50、100、200时,转染3d后,转染率分别为20.2%、43.2%、67.2%、100.0%、100.0%;hBDNF mRNA及hBDNF蛋白的表达水平亦随腺病毒MOI的增加而增加,当MOI=100时,表达到高峰,3~l0d为表达高峰期。结论 重组腺病毒体外有效转染rMSCs,成功获取基因工程干细胞hBDNF-rMSCs,该细胞可大量表达hBDNF mRNA及hBDNF蛋白,表达水平与MOI及转染时间明显相关。
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