【摘 要】
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目的:在体外模型HepG2.2.15细胞中研究靶向人乙型肝炎病毒(HBV)小分子干扰RNA(siRNA)的构效关系.方法:靶向HBV基因不同位置合成21条siRNA,分析多条siRNA在HBV 8个基因型(共12
【机 构】
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军事医学科学院放射与辐射医学研究所;军事医学科学院生物工程研究所,北京,100850
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目的:在体外模型HepG2.2.15细胞中研究靶向人乙型肝炎病毒(HBV)小分子干扰RNA(siRNA)的构效关系.方法:靶向HBV基因不同位置合成21条siRNA,分析多条siRNA在HBV 8个基因型(共120条序列)中的保守性情况以及siRNA的二级结构特点.利用乙肝表面抗原(HBsAg)ELISA定量方法与荧光定量PCR方法检测8iRNA在不同浓度下(1,10,100 nmoL/L)对HepG2.2.15细胞中乙肝病毒HBsAg和mRNA表达的抑制情况.SPSS进行定量构效关系(QSAR)分析.结果:半数(13/21)的siRNA以浓度依赖模式抑制靶基因的表达(P＜0.05).其中537,672,1263,1658等序列活性显著高于阳性对照序列.QSAR分析显示siRNA基因型同源性(P＜0.01)、S/P和X区(P＜0.05)与siRNA活性有紧密关系;重叠基因[S/P/前基因组(pregenome)mRNA]区域局部靶mRNA二级结构保守性、发卡环、多茎环和茎的碱基数目与siRNA活性相关(R=0.994,P=0.009).结论:siRNA的靶点序列、siRNA本身的一级序列与二级结构对其抑制靶基因的活性有显著影响,具有明显的构效关系.优选siRNA可能作为治疗多基因型乙肝感染的候选序列.
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