目的 探讨自噬在多发性骨髓瘤(MM)细胞阿霉素(DOX)耐药中的作用.方法 用浓度递增法诱导多发性骨髓瘤细胞系RPMI8226细胞建立DOX耐药株RPMI8226/DOX；用MTT法测定RPMI8226/DOX细胞耐药倍数；分别用透射电镜、抗LC3-FITC抗体免疫荧光、Westem blot检测MM细胞自噬情况；Annexin V/PI标记流式细胞术检测羟氯喹、3-甲基腺嘌呤(3-MA)抑制自噬对DOX诱导RPMI8226/DOX细胞凋亡的影响.结果 通过浓度梯度递增法诱导的RPMI8226/DOX细胞,耐药倍数约为10.8,透射电镜下RPMI8226/DOX细胞出现较多自噬体或自噬溶酶体；荧光显微镜下见RPMI8226/DOX细胞出现荧光颗粒；Western blot检测结果显示RPMI8226/DOX细胞LC3-Ⅱ蛋白表达水平较RPMI8226细胞升高；流式细胞术检测结果显示:单用8μmol/L羟氯喹和10 mmol/L 3-MA作用24 h后RPMI8226/DOX细胞凋亡率分别为(3.24±1.08)％和(2.81±0.80)％,与空白对照组的(2.12±1.24)％比较,差异无统计学意义(P＞0.05)；2、4、6μmol/L DOX作用24 h后RPMI8226/DOX细胞凋亡率为(9.75±2.15)％、(24.36±2.16)％、(40.51±3.14)％；在此基础上加入8μmol/L羟氯喹后细胞凋亡率分别上升为(16.56±1.89)％、(36.44±2.91)％和(62.68±3.75)％,与单用DOX相比差异有统计学意义(P＜0.05)；而加用10 mmol/L 3-MA后细胞凋亡率分别上升为(15.47±1.85)％、(39.28±3.06)％和(55.46±4.07)％,与单用DOX相比差异亦有统计学意义(P＜0.05).结论 自噬在耐药骨髓瘤细胞中被活化,抑制自噬可部分逆转DOX诱导的骨髓瘤细胞耐药,提示自噬可能为骨髓瘤细胞耐药机制之一。
自噬在多发性骨髓瘤细胞系RPMI8226阿霉素耐药中的作用
【摘 要】
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目的 探讨自噬在多发性骨髓瘤(MM)细胞阿霉素(DOX)耐药中的作用.方法 用浓度递增法诱导多发性骨髓瘤细胞系RPMI8226细胞建立DOX耐药株RPMI8226/DOX；用MTT法测定RPMI8226/DOX细胞耐药倍数；分别用透射电镜、抗LC3-FITC抗体免疫荧光、Westem blot检测MM细胞自噬情况；Annexin V/PI标记流式细胞术检测羟氯喹、3-甲基腺嘌呤(3-MA)抑制自噬
【机 构】
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730050兰州军区兰州总医院血液科,730050兰州军区兰州总医院血液科,730050兰州军区兰州总医院血液科,730050兰州军区兰州总医院血液科,730050兰州军区兰州总医院血液科,73005
【出 处】
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中华血液学杂志
【发表日期】
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2013年34期
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