探讨雷帕霉素对氨基半乳糖(Gal-N)/脂多糖(LPS)诱导急性肝损伤小鼠保护作用及其机制。
方法45只C57/b6小鼠经腹腔注射Gal-N(700 mg/kg)和LPS(10 μg/kg)建立急性肝损伤模型，并随机分为模型组、低剂量组、中剂量组和高剂量组。同时选取15只小鼠作为对照组。低剂量组、中剂量和高剂量组在建模20 min后分别经腹腔注射5、10、20 mg/kg。对照组和模型组经腹腔注射等体积的磷酸盐缓冲液(PBS)。两组在治疗4 h后眼球取血检测天冬氨酸氨基转移酶(AST)和丙氨酸氨基转移酶(ALT)的水平；采用酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平；采用苏木素-伊红(HE)染色检测各组小鼠肝组织病理学变化；采用Western blot分析小鼠肝脏组织中自噬底物微管相关蛋白1轻链3(LC3)和p62的水平。
结果与对照组AST和ALT[(30.41±5.23) U/L和(110.23±12.02)]比较，模型组、低、中和高剂量组小鼠血清AST和ALT水平显著升高[(489.39±35.65) U/L和(310.24±41.25) U/L；(385.21±30.59) U/L和(278.96±35.68) U/L；(279.94±35.14) U/L和(214.37±34.12)；(159.24±30.12) U/L和(168.63±28.32) U/L]，差异有统计学意义[(t＝8.120，t＝6.384)；(t＝7.013，t＝5.132)；(t＝5.198，t＝4.318)；(t＝3.957，t＝3.048)，P均＝0.000]。与模型组比较，低、中和高剂量组小鼠血清AST和ALT水平显著下调，差异有统计学意义[(t＝3.012，t＝3.419)；(t＝3.901，t＝4.012)；(t＝4.820，t＝5.018), P均＝0.000]。与对照组TNF-α水平[(150.44±23.19) ng/L]比较，模型组、低、中和高剂量组小鼠TNF-α水平显著升高[(509.44±49.32)、(401.43±38.09)、(298.44±29.41)、(218.29±24.21) ng/L]，差异有统计学意义(t＝6.109，t＝5.184，t＝4.109，t＝3.921，P均＝0.000)。与模型组比较，低、中和高剂量组小鼠TNF-α水平显著下调，差异有统计学意义(t＝2.194，t＝3.331，t＝5.016，P均＝0.000)。HE染色显示模型组小鼠肝脏严重受损，肝脏红细胞弥散，肝细胞间隙增加，空泡变形，肝索排列紊乱。随着雷帕霉素剂量的增加，小鼠肝脏病理性损伤程度呈剂量依赖性缓解。与对照组比较，模型组自噬被抑制，经雷帕霉素处理后细胞自噬水平明显增强。
结论雷帕霉素通过抑制哺乳动物雷帕霉素靶蛋白激酶活性，诱导自噬发生，降低TNF-α，达到了保护肝脏的目的。