【摘 要】
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为了研究低氧诱导因子(hypoxiainduciblefactor-1alpha,HIF-1α)在体外对人外周血内皮祖细胞(endothe-lialprogenitorcells,EPC)向血管内皮细胞(endothelialcells,EC)分化的
【机 构】
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上海交通大学医学院附属仁济医院心内科,上海交通大学医学院附属新华医院心内科
【基金项目】
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国家自然科学基金资助,编号:30170365
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为了研究低氧诱导因子(hypoxiainduciblefactor-1alpha,HIF-1α)在体外对人外周血内皮祖细胞(endothe-lialprogenitorcells,EPC)向血管内皮细胞(endothelialcells,EC)分化的影响,用密度梯度离心法分离人外周血EPC,电穿孔技术转染HIF-1α质粒至EPC,计算转染效率,RT-PCR方法测定HIF-1α、HIF-1β及HIF-1α下游靶基因血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)mRNA在质粒转染前后含量变化,免疫细胞化学方法检测在常氧下HIF-1α蛋白在HIF-1α质粒转染前后不同时点蛋白表达情况,细胞膜表面抗原决定簇流式细胞术测定FITC-CD31+EPCs/EC在未转染组、pEGFP空质粒或HIF-1α质粒转染组转染3-10天后的组间差异,光镜下观察转染前后细胞形态及分化程度。结果表明:EPC获得后经电穿孔转染,质粒转染效率约20%;RT-PCR示HIF-1αmRNA在常氧中有表达,并在HIF-1α过表达组含量增加(P<0.05);其下游靶基因VEGF在HIF-1α过表达组表达上调(P<0.05);HIF-1β表达在各组中无明显差异(P>0.05)。免疫组织化学显示常氧下HIF-1α蛋白无表达,转染HIF-1α质粒12小时后HIF-1α蛋白表达阳性,转染24小时后蛋白表达阴性。流式细胞仪检测显示电穿孔转染HIF-1α质粒使CD31+细胞的百分比增加(P<0.05)。细胞形态学观察显示:未转染及pEGFP空质粒转染组细胞在培养6天后呈集落样散在分布,培养14天后贴壁细胞部分呈梭样;穿孔转染的HIF-1α质粒组细胞于培养6天后集落周边分化出梭样贴壁细胞,培养14天后呈梭样,或铺路石样牢固贴壁。结论:HIF-1α质粒能有效地用于基因干扰治疗,有助于EPC向EC分化,为体内研究奠定了基础,也为进一步体内诱导血管新生、治疗缺血性心脏病提供了更广阔的治疗选择。
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