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【摘要】目的：建立了刺五加总苷总黄酮软胶囊中异嗪皮啶的含量测定方法。方法：采用HPLC法测定，使用Diamonsil C18（4.6mm×250 mm，5μm）色谱柱，流动相：乙腈―水（18:82）1.0%的磷酸溶液，流速：1.0ml/min，检测波长：344nm。结果：异嗪皮啶在20.40～102.0μg/ml范围内有良好线性关系（r=0.9998），平均回收率为98.68%，RSD=1.1%（n=6）。结论：该法操作简便、准确、重现性好，可用于刺五加总苷总黄酮软胶囊中异嗪皮啶的质量控制方法。
【关键词】刺五加总苷总黄酮软胶囊；异嗪皮啶；HPLC
中藥5类新药刺五加总苷总黄酮软胶囊是以刺五加总苷总黄酮提取物，加定量植物油和赋形剂经特殊制剂工艺制成。产品具有增强机体免疫力、缓解体力疲劳、抗抑郁的功效。刺五加含有多种化学成分，其中异嗪皮啶是有效成分之一。本实验建立了一种HPLC法测定其中总异嗪皮啶含量，重现性好。可用于评价刺五加及其制剂中该成分的指标。
1 仪器与试剂
美国Agilent 1100色谱仪； 异嗪皮啶对照品(中国生物制品检定所，供含量测定用）；乙腈为色谱纯，磷酸、甲醇为分析纯；水为纯化水。
2 方法与结果
2.1 检测波长的选择
取异嗪皮啶对照品适量，加甲醇溶解，在200～400 nm波长扫描，结果本品在344.2nm处有最大吸收，故选择344nm作为检测波长。
2.2 色谱条件
色谱柱：Diamonsil C18（4.6mm×250 mm，5μm）；流动相：乙腈―水（18:82）1.0%的磷酸溶液；流速：1.0ml/min；检测波长：344nm；进样量：10μl。
2.3对照品溶液的制备
精密称取异嗪皮啶对照品5.10mg，置25ml容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。精密量取对照品贮备液3ml，置10ml容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，即得浓度为61.2μg/ml对照品溶液。
2.4 供试品溶液的制备
取本品6粒,剪开,置100ml锥形瓶中以少量正己烷洗尽油分,加甲醇50ml,超声30min,放冷,抽滤,滤液回收至干,残渣加2mol/L的H2SO4溶液30ml, 沸水浴回流2h, 稍冷, 加氯仿20ml 回流30min,再用氯仿萃取3次, 每次20ml, 水洗两次, 每次30ml, 氯仿液回收至干,加甲醇定容至10ml,微孔滤膜滤过, 取续滤液, 即得。
2.5 方法学考察
2.5.1 线性关系考察
分别精密量取异嗪皮啶对照品贮备液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml置10ml量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，照高效液相色谱法,分别量取10μl 注入液相色谱仪,测定。以浓度为横坐标,峰面积为纵坐标进行线性回归,方程为Y=47.392X+142.8，r=0.9998。结果表明, 异嗪皮啶在20.40～102.0μg/ml范围内呈良好线性关系。
2.5.2 精密度试验
取同一样品溶液连续进样6次，测得异嗪皮啶的峰面积RSD=1.2%。
2.5.3 重复性试验
取同一批刺五加总苷总黄酮软胶囊，按2.4项下的方法操作，平行制备6份样品溶液，依样品测定法测定，计算异嗪皮啶的含量，结果RSD=1.7%。
2.5.4 稳定性试验
将同一样品溶液室温条件下放置，分别于0、2、4、6、8、12h按上述色谱条件测定样品液峰面积，并计算相对标准偏差。结果RSD=1.8%。表明样品溶液在12h内稳定。
2.5.5 回收率试验
采用加样回收法，取已知含量的刺五加总苷总黄酮软胶囊6粒，添加一定量的异嗪皮啶对照品溶液，按2.4项下的方法操作，制备成加样回收供试溶液，依样品测定法测定。结果，异嗪皮啶的加样回收率为98.68%，RSD=1.1%（n=6）。
2.6 样品测定
取三批样品，按2.4项下的方法操作，制成供试品溶液，在上述色谱条件下，分别精密量取对照品溶液和供试品溶液各10μl注入液相色谱仪，依法测定。结果三批样品含量均符合规定。
3 讨论
在测定异嗪皮啶含量时，曾分别考察了不同比列的乙腈-水、乙腈-水-冰醋酸、乙腈-水-磷酸等多种流动相系统，结果乙腈-水（18:82）1.0%的磷酸溶液分离效果最佳。
通过以上实验测定刺五加总苷总黄酮软胶囊中异嗪皮啶的含量，结果表明此方法简便、准确、稳定性与重复性好，可有效控制产品质量。
参考文献
[1]赵陆华，屠颖，赵振宇等，HPLC法测定刺五加软胶囊中异嗪皮啶含量，中草药， 2003，34（10）:911-912。
[2]金佩芬，高效液相色谱法测定刺五加注射液中异嗪皮啶含量，药物鉴定，2009,18（3）:9。
【关键词】刺五加总苷总黄酮软胶囊；异嗪皮啶；HPLC
中藥5类新药刺五加总苷总黄酮软胶囊是以刺五加总苷总黄酮提取物，加定量植物油和赋形剂经特殊制剂工艺制成。产品具有增强机体免疫力、缓解体力疲劳、抗抑郁的功效。刺五加含有多种化学成分，其中异嗪皮啶是有效成分之一。本实验建立了一种HPLC法测定其中总异嗪皮啶含量，重现性好。可用于评价刺五加及其制剂中该成分的指标。
1 仪器与试剂
美国Agilent 1100色谱仪； 异嗪皮啶对照品(中国生物制品检定所，供含量测定用）；乙腈为色谱纯，磷酸、甲醇为分析纯；水为纯化水。
2 方法与结果
2.1 检测波长的选择
取异嗪皮啶对照品适量，加甲醇溶解，在200～400 nm波长扫描，结果本品在344.2nm处有最大吸收，故选择344nm作为检测波长。
2.2 色谱条件
色谱柱：Diamonsil C18（4.6mm×250 mm，5μm）；流动相：乙腈―水（18:82）1.0%的磷酸溶液；流速：1.0ml/min；检测波长：344nm；进样量：10μl。
2.3对照品溶液的制备
精密称取异嗪皮啶对照品5.10mg，置25ml容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。精密量取对照品贮备液3ml，置10ml容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，即得浓度为61.2μg/ml对照品溶液。
2.4 供试品溶液的制备
取本品6粒,剪开,置100ml锥形瓶中以少量正己烷洗尽油分,加甲醇50ml,超声30min,放冷,抽滤,滤液回收至干,残渣加2mol/L的H2SO4溶液30ml, 沸水浴回流2h, 稍冷, 加氯仿20ml 回流30min,再用氯仿萃取3次, 每次20ml, 水洗两次, 每次30ml, 氯仿液回收至干,加甲醇定容至10ml,微孔滤膜滤过, 取续滤液, 即得。
2.5 方法学考察
2.5.1 线性关系考察
分别精密量取异嗪皮啶对照品贮备液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml置10ml量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，照高效液相色谱法,分别量取10μl 注入液相色谱仪,测定。以浓度为横坐标,峰面积为纵坐标进行线性回归,方程为Y=47.392X+142.8，r=0.9998。结果表明, 异嗪皮啶在20.40～102.0μg/ml范围内呈良好线性关系。
2.5.2 精密度试验
取同一样品溶液连续进样6次，测得异嗪皮啶的峰面积RSD=1.2%。
2.5.3 重复性试验
取同一批刺五加总苷总黄酮软胶囊，按2.4项下的方法操作，平行制备6份样品溶液，依样品测定法测定，计算异嗪皮啶的含量，结果RSD=1.7%。
2.5.4 稳定性试验
将同一样品溶液室温条件下放置，分别于0、2、4、6、8、12h按上述色谱条件测定样品液峰面积，并计算相对标准偏差。结果RSD=1.8%。表明样品溶液在12h内稳定。
2.5.5 回收率试验
采用加样回收法，取已知含量的刺五加总苷总黄酮软胶囊6粒，添加一定量的异嗪皮啶对照品溶液，按2.4项下的方法操作，制备成加样回收供试溶液，依样品测定法测定。结果，异嗪皮啶的加样回收率为98.68%，RSD=1.1%（n=6）。
2.6 样品测定
取三批样品，按2.4项下的方法操作，制成供试品溶液，在上述色谱条件下，分别精密量取对照品溶液和供试品溶液各10μl注入液相色谱仪，依法测定。结果三批样品含量均符合规定。
3 讨论
在测定异嗪皮啶含量时，曾分别考察了不同比列的乙腈-水、乙腈-水-冰醋酸、乙腈-水-磷酸等多种流动相系统，结果乙腈-水（18:82）1.0%的磷酸溶液分离效果最佳。
通过以上实验测定刺五加总苷总黄酮软胶囊中异嗪皮啶的含量，结果表明此方法简便、准确、稳定性与重复性好，可有效控制产品质量。
参考文献
[1]赵陆华，屠颖，赵振宇等，HPLC法测定刺五加软胶囊中异嗪皮啶含量，中草药， 2003，34（10）:911-912。
[2]金佩芬，高效液相色谱法测定刺五加注射液中异嗪皮啶含量，药物鉴定，2009,18（3）:9。