【摘 要】
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目的探讨膜相关蛋白NUMB调控肿瘤增殖的机制。方法构建NUMB基因敲除载体,转染Hela细胞后,经抗性筛选获得稳定细胞株,通过实时定量PCR(qRT-PCR)和Western blot检测NUMB基因和
【机 构】
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四川大学华西第二医院出生缺陷与相关妇儿疾病教育部重点实验室;
【基金项目】
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国家自然科学基金(No.30771102)资助
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目的探讨膜相关蛋白NUMB调控肿瘤增殖的机制。方法构建NUMB基因敲除载体,转染Hela细胞后,经抗性筛选获得稳定细胞株,通过实时定量PCR(qRT-PCR)和Western blot检测NUMB基因和蛋白表达,验证NUMB基因敲除效果。采用裸鼠成瘤实验研究NUMB基因敲除对肿瘤增殖的影响;利用流式细胞术和Brdu标记实验检测NUMB缺失对细胞周期的影响;在体外模型中检测细胞周期各个时期多种调控蛋白的表达水平。结果 Western blot及qRT-PCR结果表明NUMB基因敲除的体外模型构建成功;裸鼠成瘤实验显示NUMB基因敲除促进肿瘤增殖;流式细胞术和Brdu标记实验表明NUMB基因缺失加速细胞周期G1/S期转换,促进肿瘤细胞增殖;Western blot检测发现NUMB基因敲除组细胞周期调控蛋白Cyclin-E的表达增加,而P27的表达降低。结论 NUMB通过调控Cyclin-E以及P27的蛋白水平影响细胞周期,进而调控肿瘤增殖。
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