【摘 要】
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背景:组织蛋白酶B(CB)与恶性肿瘤的分期、转移和预后关系密切.目的:建立CB酶联免疫吸附测定(ELISA)方法,以便评价肿瘤患者血清CB含量与预后的关系.方法:将含有CB cDNA的重组
【机 构】
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上海第二医科大学附属仁济医院上海市消化疾病研究所
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背景:组织蛋白酶B(CB)与恶性肿瘤的分期、转移和预后关系密切.目的:建立CB酶联免疫吸附测定(ELISA)方法,以便评价肿瘤患者血清CB含量与预后的关系.方法:将含有CB cDNA的重组痘苗病毒转染Hela细胞,表达目的蛋白重组CB;经Western blot分析和制备型电泳纯化后,免疫新西兰大白兔,获得CB多克隆抗体.纯化后的抗体一部分作为固化抗体,另一部分用辣根过氧化物酶标记;棋盘滴定法确定工作浓度.结果:痘苗病毒真核表达系统可以高效表达目的蛋白.制备型电泳能简单、有效地纯化蛋白.重组CB免疫动物后,可获得高效价的CB多克隆抗体,用以制备相应的固化抗体和酶标抗体检测CB.结论:用重组CB免疫动物后可获得相应抗体,以建立CB检测的ELISA方法.
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