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[摘 要]：目的：建立一种测定化痔胶囊含量的方法。方法：以Zobax-SB C18。(5μm，4.6mm×200mm)为分析柱，乙腈－水－冰醋酸(20:80:0.1)为流动相，检测波长255nm，进样量5μL。采用HPLC法测定芦丁的含量。结果：芦丁在0.144～0.864μg范围内，线性关系良好(r=0.9991)，平均回收率为97.18％，RSD=1.06％(n=9)。结论：本法操作简便，结果可靠，重现性好，可作为该产品质量控制的方法。
[关键词]：化痔胶囊 芦丁 HPLC 含量测定
本品是在部颁药品标准第十五册化痔片的基础上进行剂型改革，将片剂改成胶囊剂，处方由槐米、茜草、枳壳、三棱及三七等五味药材组成，具有清热、凉血、止血、行气散瘀之功效；用于治疗内痔、外痔、混合痔、内外痔血栓等症。改胶囊剂后，每次口服剂量为原片剂的2/3，即可产生与片剂相同的疗效，临床效果良好。
1 仪器与试药
1．1 仪器 SPD-10AT液相泵 SPD-10A紫外检测器(日本岛津)。
1．2 试药 芦丁对照品(供含量测定用，批号：080-9002 中国药品生物制品检定所提供)。乙腈为色谱纯(山东禹王实业有限公司提供，批号：20031227)，冰醋酸为分析纯(长春化学试剂厂提供，纯度99％)，水为重蒸馏水。化痔胶囊自制，每粒0.40g。
2 方法及结果
2．1 色谱条件与系统适应性试验 色谱柱：Zobax-SBC18(北京八方公司)(5μm，4.6mm×200mm)(大连依利特科学分离有限公司提供)；流动相：乙腈－水－冰醋酸(20:80:0.1)；流速：1.0mL/min；柱温：25℃；检测波长为255nm。理论塔板数不低于3000，在此条件下，芦丁与其他组分完全分离。分别见图1、图2、图3。
2．2 线性关系考察 精密称取芦丁对照品适量，加甲醇配制成含芦丁72μg/mL的溶液。精密吸取上述芦丁对照品溶液2、4、6、8、10和12μL，分别注入液相色谱仪中，测定芦丁色谱峰峰面积，以进样量(μg)为横坐标，以峰面积(A)为纵坐标，进行回归处理，结果芦丁在0.144～0.864μg范围内，进样量与峰面积线性关系良好，回归方程为Y=9.512×10-99X-9.985×103，r=0.9991；
2．3 对照品精密度试验 精密吸取浓度为72tμg/mL芦丁对照品溶液各5μL，共计6份，在前述的色谱条件下，分别注入液相色谱仪中，测定芦丁色谱峰峰面积。结果芦丁RSD=1.69％，符合法规规定。
2．4 供试品溶液的制备 取批号070401样品20粒，倾出内容物，研细，取1g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入70％乙醇100mL，称定重量，超声提取60分钟，放冷，再称定重量，用70％乙醇补足减失重量，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液1m乙置10mL量瓶中，用70％乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。
2．5 阴性对照品溶液制备 取处方量药材，除去槐米，按制备工艺制成阴性对照品，再按“2.4”项下方法制备。
2．6 供试品溶液精密度试验 精密吸取同一供试品溶液5μL，平行进样6次，分别注入液相色谱仪中，测定峰面积，结果RSD=0.67％，说明本方法精密度好。
2．7 供试品溶液稳定性考查 取供试品溶液(批号070401)与对照品溶液，按0、2、4、8及12h时间间隔，分别进样5μL，测定峰面积，计算，样品中芦丁含量RSD为1.5％。试验结果表明，供试品溶液待测组分在12h内化学性质稳定。
2．8 含量测定重复性试验 取本品(批号：070401)适量，研细，取1g，精密称定，共计6份，按“2.4”项下平行试验，测定大黄素和大黄酚色谱峰面积，计算样品中芦丁含量，结果样品中芦丁含量RSD=1.70％，符合法规规定。
2．9 加样回收率试验 取批号070401样品20粒，倾出内容物，研细，取0.5g，共计9份，精密称定。每3份平行，分别精密加入芦丁对照品28mg、38mg及46mg，按“含量测定”项下试验，测定加标样品中芦丁含量，计算，得出本含量测定方法芦丁的回收率。结果见表1。
从上述回收率试验结果可知，本方法回收率良好。
2．10 样品中芦丁含量测定 取本品10批样品，按上述测定法取样测定，测定大黄素和大黄酚色谱峰峰面积，计算各批样品中芦丁的平均含量，结果样品中含芦丁分别30.01、26，32、26，85、24，50、25，58、28，67、32，14、32，24、27，50、28，21mg/粒。2，11 槐米药材中芦丁含量测定 取不同来源的槐米药材适量，粉碎，取0，3-0，5g,精密称定重量，精密加入70％乙醇100mL，浸泡2h，称定重量，超声提取60分钟，放冷，用70％乙醇补足减失的重量，滤过，弃去初滤液，精密吸取续滤液1mL置10mL量瓶中，用70％乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。
精密吸取供试品溶液及芦丁对照品溶液各5μl，注入液相色谱仪中，测定，计算，其实验结果分别为17，83％、15，46％、20，12％。
根据上述试验结果，暂定槐米药材中芦丁含量不得低于15％。
3 讨论
3．1 制备供试品溶液时，曾分别采用70％乙醇超声提取30分钟、60分钟；70％乙醇回流提取30分钟和甲醇超声提取30分钟，分别注入液相色谱仪中，测定芦丁色谱峰峰面积，其实验结果表明采用70％7,醇超声提取60分钟可基本将芦丁提取完全，因此供试液制备方法确定采用70％乙醇超声提取肋分钟。
3．2 试验中曾采用药典方法及用乙腈－水－冰醋酸(20:80:0.2)、乙腈－水(20:80)等流动相进行分离，但色谱峰的对称因子及分离度均不如乙腈－水－冰醋酸(20:80:0.1)，故确定乙腈－水－冰醋酸(20:80:0.1)为流动相。
[关键词]：化痔胶囊 芦丁 HPLC 含量测定
本品是在部颁药品标准第十五册化痔片的基础上进行剂型改革，将片剂改成胶囊剂，处方由槐米、茜草、枳壳、三棱及三七等五味药材组成，具有清热、凉血、止血、行气散瘀之功效；用于治疗内痔、外痔、混合痔、内外痔血栓等症。改胶囊剂后，每次口服剂量为原片剂的2/3，即可产生与片剂相同的疗效，临床效果良好。
1 仪器与试药
1．1 仪器 SPD-10AT液相泵 SPD-10A紫外检测器(日本岛津)。
1．2 试药 芦丁对照品(供含量测定用，批号：080-9002 中国药品生物制品检定所提供)。乙腈为色谱纯(山东禹王实业有限公司提供，批号：20031227)，冰醋酸为分析纯(长春化学试剂厂提供，纯度99％)，水为重蒸馏水。化痔胶囊自制，每粒0.40g。
2 方法及结果
2．1 色谱条件与系统适应性试验 色谱柱：Zobax-SBC18(北京八方公司)(5μm，4.6mm×200mm)(大连依利特科学分离有限公司提供)；流动相：乙腈－水－冰醋酸(20:80:0.1)；流速：1.0mL/min；柱温：25℃；检测波长为255nm。理论塔板数不低于3000，在此条件下，芦丁与其他组分完全分离。分别见图1、图2、图3。
2．2 线性关系考察 精密称取芦丁对照品适量，加甲醇配制成含芦丁72μg/mL的溶液。精密吸取上述芦丁对照品溶液2、4、6、8、10和12μL，分别注入液相色谱仪中，测定芦丁色谱峰峰面积，以进样量(μg)为横坐标，以峰面积(A)为纵坐标，进行回归处理，结果芦丁在0.144～0.864μg范围内，进样量与峰面积线性关系良好，回归方程为Y=9.512×10-99X-9.985×103，r=0.9991；
2．3 对照品精密度试验 精密吸取浓度为72tμg/mL芦丁对照品溶液各5μL，共计6份，在前述的色谱条件下，分别注入液相色谱仪中，测定芦丁色谱峰峰面积。结果芦丁RSD=1.69％，符合法规规定。
2．4 供试品溶液的制备 取批号070401样品20粒，倾出内容物，研细，取1g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入70％乙醇100mL，称定重量，超声提取60分钟，放冷，再称定重量，用70％乙醇补足减失重量，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液1m乙置10mL量瓶中，用70％乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。
2．5 阴性对照品溶液制备 取处方量药材，除去槐米，按制备工艺制成阴性对照品，再按“2.4”项下方法制备。
2．6 供试品溶液精密度试验 精密吸取同一供试品溶液5μL，平行进样6次，分别注入液相色谱仪中，测定峰面积，结果RSD=0.67％，说明本方法精密度好。
2．7 供试品溶液稳定性考查 取供试品溶液(批号070401)与对照品溶液，按0、2、4、8及12h时间间隔，分别进样5μL，测定峰面积，计算，样品中芦丁含量RSD为1.5％。试验结果表明，供试品溶液待测组分在12h内化学性质稳定。
2．8 含量测定重复性试验 取本品(批号：070401)适量，研细，取1g，精密称定，共计6份，按“2.4”项下平行试验，测定大黄素和大黄酚色谱峰面积，计算样品中芦丁含量，结果样品中芦丁含量RSD=1.70％，符合法规规定。
2．9 加样回收率试验 取批号070401样品20粒，倾出内容物，研细，取0.5g，共计9份，精密称定。每3份平行，分别精密加入芦丁对照品28mg、38mg及46mg，按“含量测定”项下试验，测定加标样品中芦丁含量，计算，得出本含量测定方法芦丁的回收率。结果见表1。
从上述回收率试验结果可知，本方法回收率良好。
2．10 样品中芦丁含量测定 取本品10批样品，按上述测定法取样测定，测定大黄素和大黄酚色谱峰峰面积，计算各批样品中芦丁的平均含量，结果样品中含芦丁分别30.01、26，32、26，85、24，50、25，58、28，67、32，14、32，24、27，50、28，21mg/粒。2，11 槐米药材中芦丁含量测定 取不同来源的槐米药材适量，粉碎，取0，3-0，5g,精密称定重量，精密加入70％乙醇100mL，浸泡2h，称定重量，超声提取60分钟，放冷，用70％乙醇补足减失的重量，滤过，弃去初滤液，精密吸取续滤液1mL置10mL量瓶中，用70％乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。
精密吸取供试品溶液及芦丁对照品溶液各5μl，注入液相色谱仪中，测定，计算，其实验结果分别为17，83％、15，46％、20，12％。
根据上述试验结果，暂定槐米药材中芦丁含量不得低于15％。
3 讨论
3．1 制备供试品溶液时，曾分别采用70％乙醇超声提取30分钟、60分钟；70％乙醇回流提取30分钟和甲醇超声提取30分钟，分别注入液相色谱仪中，测定芦丁色谱峰峰面积，其实验结果表明采用70％7,醇超声提取60分钟可基本将芦丁提取完全，因此供试液制备方法确定采用70％乙醇超声提取肋分钟。
3．2 试验中曾采用药典方法及用乙腈－水－冰醋酸(20:80:0.2)、乙腈－水(20:80)等流动相进行分离，但色谱峰的对称因子及分离度均不如乙腈－水－冰醋酸(20:80:0.1)，故确定乙腈－水－冰醋酸(20:80:0.1)为流动相。