改良的大鼠近端肾小管上皮细胞分离纯化方法

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目的 建立纯度高、操作简便的大鼠近端肾小管上皮细胞分离纯化方法.方法 Wistar大鼠无菌取肾前先心脏抽血替代原位肾脏灌注,分离肾皮质,经Ⅰ型胶原酶消化后用45%Percoll分离液制备细胞悬液直接连续密度梯度离心.所得细胞用含10%胎牛血清的DMEM-F12培养基原代培养并传代,根据细胞形态、细胞角蛋白18(CK18)和水通道蛋白1(AQP1)免疫细胞化学染色及碱性磷酸酶化学染色进行鉴定.结果 此简化方法获得的肾小管细胞中肾小球掺杂明显减少,培养4~5 d后细胞融合长满,呈典型上皮样细胞的鹅卵石状,其CK18、AQP1免疫细胞化学染色及碱性磷酸酶化学染色几乎均呈阳性,证实所培养细胞为近端肾小管上皮细胞.结论 改良后的分离纯化方法可获得大量高纯度近端肾小管上皮细胞,操作简便。

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