【摘 要】
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目的 应用腺病毒AdEasy系统构建含1.3拷贝乙型肝炎病毒(HBV)基因组的腺病毒载体,并鉴定目的蛋白的表达.方法 采用基因重组技术将4.1 kb的1.3拷贝HBV基因序列克隆在腺病毒穿梭质粒上,通过在大肠杆菌内与骨架质粒的同源重组,构建重组腺病毒质粒,经293T细胞包装后产生重组腺病毒,感染肝癌细胞后检测乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)、HBV DNA和乙型肝炎
【机 构】
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300100天津市南开医院普外科,300100天津市南开医院普外科
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目的 应用腺病毒AdEasy系统构建含1.3拷贝乙型肝炎病毒(HBV)基因组的腺病毒载体,并鉴定目的蛋白的表达.方法 采用基因重组技术将4.1 kb的1.3拷贝HBV基因序列克隆在腺病毒穿梭质粒上,通过在大肠杆菌内与骨架质粒的同源重组,构建重组腺病毒质粒,经293T细胞包装后产生重组腺病毒,感染肝癌细胞后检测乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)、HBV DNA和乙型肝炎病毒X蛋白(HBX)蛋白的表达,以转HBV基因组的HepG2.2.15肝癌细胞株为对照,同时检测上述指标含量.结果 双酶切下的1.3拷贝HBV序列成功克隆在腺病毒穿梭质粒上,与骨架质粒同源重组后的腺病毒质粒转染293T包装细胞后产生了重组腺病毒,感染HepG2细胞后能在细胞培养上清中检测HBsAg和HBeAg的含量分别为70.70、5.50 IU/ml,HBV DNA含量为1.2×107 copies/ml.同期检测的HepG2.2.15细胞内HBsAg和HBeAg的含量分别为3.51、44.85 IU/ml,HBV DNA含量为7.4×104 copies/ml.Western blot检测可见被感染的HepG2细胞有HBX蛋白的表达.结论 应用AdEasy系统成功构建含1.3拷贝HBV基因组的重组腺病毒载体,经包装细胞产生的病毒感染靶细胞后能检测到HBV抗原的表达。
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