【摘 要】
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目的 观察转染人抗凝血酶-3 (hAT-Ⅲ)的猪骨髓间充质干细胞(MSC)在体外异种移植凝血模型中的抗凝血作用.方法 提取α-1,3-半乳糖转移酶基因敲除小型猪的MSC,利用流式细胞术鉴
【机 构】
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第四军医大学西京医院肝胆外科, 西安,710032
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目的 观察转染人抗凝血酶-3 (hAT-Ⅲ)的猪骨髓间充质干细胞(MSC)在体外异种移植凝血模型中的抗凝血作用.方法 提取α-1,3-半乳糖转移酶基因敲除小型猪的MSC,利用流式细胞术鉴定其表型.构建含hAT-Ⅲ的慢病毒载体,转染MSC,使其表达hAT-Ⅲ,分别应用逆转录聚合酶链反应、蛋白质印迹法和免疫荧光技术检测hAT-Ⅲ的表达情况.在体外人血浆和猪内皮细胞共培养体系中,分别加入转染空质粒MSC(空转染组)、转染hAT-ⅢMSC(转染组)、重组hAT-ⅢMSC(重组hAT-Ⅲ组)和经鼠抗hAT-Ⅲ阻断性抗体处理的转染hAT-Ⅲ MSC(抗hAT-Ⅲ组),并提取上清液检测凝血酶-抗凝血酶复合物(TAT)的含量,并进行复钙实验,检测凝集时间.结果 提取的细胞具有MSC表型,转染后成功表达hAT-Ⅲ基因,实验组相对表达量为2.80±0.51.空转染组、转染组、重组hAT-Ⅲ组和抗hAT-Ⅲ组TAT含量为(4.33±1.20) ng/ml、(15.00±2.89)ng/ml、(22.67±1.45) ng/ml、(3.02±1.16)ng/ml;在凝血模型中转染组TAT含量高于空转染组和抗hAT-Ⅲ组(P＜0.05).空转染组、转染组、重组hAT-Ⅲ组和抗hAT-Ⅲ组的凝集时间为(150.0±4.58)s、(172.0±5.51)s、(181.3±4.06)s和(132.7±6.12)s;转染组凝集时间少于空转染组和抗hAT-Ⅲ组(P＜0.05).结论 基因修饰的MSC能够表达hAT-Ⅲ,并可以有效抑制体外异种移植凝血模型中人血浆中的凝血酶.
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