【摘 要】
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目的克隆小鼠耳蜗组织中重要神经营养因子NT3的基因,并对其进行原核表达鉴定,为进一步研究该基因对内耳听觉功能的影响以及对耳聋的基因治疗提供基础. 方法根据所设计的引物
【机 构】
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第四军医大学西京医院耳鼻咽喉科,第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室
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目的克隆小鼠耳蜗组织中重要神经营养因子NT3的基因,并对其进行原核表达鉴定,为进一步研究该基因对内耳听觉功能的影响以及对耳聋的基因治疗提供基础. 方法根据所设计的引物用RT-PCR方法扩增目的基因,克隆入pUC19载体,行酶切鉴定和测序;然后进一步克隆入原核表达载体pDH,温度诱导表达,SDS-PAGE检测表达产物. 结果 RT-PCR得到长度为777bp的基因片段,克隆后酶切鉴定正确,测序结果经BLAST对比,与GenBank中小鼠NT-3序列完全一致. 成功构建了原核表达载体,经温度诱导表达出NT3蛋
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