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热休克蛋白40(Hsp40)作为Hsp70蛋白的分子伴侣,在病毒生命周期中扮演重要角色,笔者拟通过慢病毒感染技术分别建立Hsp40基因过表达和沉默的猪肺泡巨噬细胞系,为以后开展猪Hsp40蛋白调控猪圆环病毒2型(PCV2)复制的机制研究提供有效模型。提取猪肺泡巨噬细胞(PAM)的总RNA,反转录成c DNA后用于Hsp40基因编码区的扩增,并将其克隆到慢病毒过表达载体p CDH-CMV-MCS-EF1-Green Puro。测序正确后,设计针对Hsp40基因的4条sh RNA干扰序列和1条阴性对照序列,并将其分别插入到慢病毒干扰载体p CDH-U6-MCS-EF1-Green Puro。将上述6个载体分别与3个辅助载体p VSV-G、p Rev和p Gag/Pol共转染293T细胞进行病毒包装,测定其滴度后用于感染PAM细胞,采用RT-q PCR和Western-blot方法对Hsp40的表达效果进行鉴定。猪Hsp40基因过表达和沉默重组慢病毒的获得为进一步研究Hsp40蛋白对PCV2复制的影响和机制奠定了基础。