【摘 要】
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为构建Ⅱ型鸡星状病毒衣壳蛋白昆虫细胞表达载体,并免疫小鼠制备多克隆抗体,研究根据病毒衣壳蛋白基因序列设计引物,采用RT-PCR扩增衣壳蛋白基因全长,亚克隆至杆状病毒转移载体pFast-Bac-HTA,经过蓝白斑筛选获得重组杆状病毒质粒rBacmid-cap,将鉴定正确的阳性质粒转染至昆虫Sf9细胞获得重组杆状病毒。Western-blot和间接免疫荧光检测结果表明,Ⅱ型鸡星状病毒衣壳蛋白在昆虫Sf9细胞中成功表达,利用表达衣壳蛋白的昆虫细胞免疫小鼠制备的多克隆抗体血清与天然病毒也具有良好的反应性。试验结果
【机 构】
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扬州大学教育部禽类预防医学重点实验室,扬州大学江苏省动物预防医学重点实验室,江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心,扬州大学比较医学研究院
【基金项目】
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国家自然科学基金项目(31772734),扬州大学本科生科创项目(X20190666),江苏省大学生实践创新训练计划(201911117103Y),江苏高校“青蓝工程”资助项目,江苏高校优势学科建设工程资助项目。
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为构建Ⅱ型鸡星状病毒衣壳蛋白昆虫细胞表达载体,并免疫小鼠制备多克隆抗体,研究根据病毒衣壳蛋白基因序列设计引物,采用RT-PCR扩增衣壳蛋白基因全长,亚克隆至杆状病毒转移载体pFast-Bac-HTA,经过蓝白斑筛选获得重组杆状病毒质粒rBacmid-cap,将鉴定正确的阳性质粒转染至昆虫Sf9细胞获得重组杆状病毒。Western-blot和间接免疫荧光检测结果表明,Ⅱ型鸡星状病毒衣壳蛋白在昆虫Sf9细胞中成功表达,利用表达衣壳蛋白的昆虫细胞免疫小鼠制备的多克隆抗体血清与天然病毒也具有良好的反应性。试验结果
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