目的采用HPLC法测定重组人干扰素α2b注射液中吐温80的含量。方法按设置的色谱条件对检测重组人干扰素α2b注射液中吐温80含量的HPLC方法进行专属性验证、系统适应性验证、线性范围测定、实验内重复性验证、日间重复性验证、最低检测限测定、准确性验证,并对3批重组人干扰素α2b注射液中吐温80的含量进行检测。结果该测定方法具有专属性;系统适应性良好;线性范围为0.031 25～2.5 mg/ml,R2=0.999 7,线性关系良好;实验内重复性,峰面积和浓度的RSD值分别为0.71%和0.56%;日间重复性,保留时间和峰面积的RSD值分别为0.47%和2.76%;最低检测限为10 mg/L;加样回收率分别为101.99%、99.96%和102.2%,RSD=1.16%;3批人干扰素α2b注射液中吐温80的相对含量分别为0.940、0.936和0.950 mg/ml,分别为标示量的94.0%、93.6%和95.0%。结论本方法准确、快速、可靠,可用于重组人干扰素α2b注射液中吐温80含量的测定。