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目的为韧带细胞的病理、生理及组织工程学等研究提供方法及体外模型.方法采用胶原酶分离新西兰白兔的膝关节前十字韧带(anteriorcruciateligament,ACL)、内侧副韧带(medialcollateralligament,MCL)及人膝关节ACL和后十字韧带(posteriorcruciateligament,PCL)细胞,选择合适的条件进行体外培养,分析细胞的生物学特性.结果在含体积分数为10%胎牛血清的DMEM培养液中细胞生长良好、增殖快,但RPMI1640及F12培养液不适宜这些细胞的生长.在体外培养条件下兔ACL和MCL细胞形态相似,但MCL较ACL生长快,两种细胞合成胶原的总量相同.相对MCL细胞,ACL合成的Ⅰ型胶原较多而Ⅲ型胶原较少.人ACL和PCL细胞形态及生长特性基本相似,免疫细胞学方法检测表明两种细胞均有Ⅰ、Ⅲ型胶原及纤维连接蛋白表达.结论体外培养的人ACL和PCL细胞生物学特性相似.兔ACL和MCL细胞形态相似,但生物学特性存在差异.本实验为韧带成纤维细胞的培养及相关研究提供了简单、有效的方法.