【摘 要】
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目的:构建人血管内皮生长因子(VEGF)-C基因慢病毒表达载体,并研究其在胃癌细胞中的功能。方法:采用SYBR Green相对定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)及蛋白免疫印迹法(Western
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目的:构建人血管内皮生长因子(VEGF)-C基因慢病毒表达载体,并研究其在胃癌细胞中的功能。方法:采用SYBR Green相对定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)及蛋白免疫印迹法(Westernblot)检测6种不同类型的胃癌细胞系MKN-45、MKN-28、NCI-N87、BGC-823、AGS和SGC-7901中VEGF-C mRNA及其蛋白表达水平;通过构建VEGF-C基因慢病毒表达载体进行细胞增殖、克隆形成和内皮细胞管形成实验,按实验组(MKN-45-GV/C)、对照组(MKN-45-GV)和空白细胞组(MKN-45)加以比较。结果:qRT-PCR和Western blot实验表明,在6种胃癌细胞中均可检测到VEGF-C mRNA及其蛋白的表达,其中在胃癌细胞MKN-45中表达最低(0.45±1.44),SGC-7901中表达最高(31.13±0.75);增殖实验结果显示,与对照组比较,实验组细胞增殖数量明显增加(P<0.001);克隆形成结果显示,实验组和对照组细胞在每平均视野形成克隆数分别为6.23±0.32和1.40±1.67,克隆形成率分别为85%和31%(P<0.05);内皮细胞管形成实验结果显示,实验组、对照组和空白细胞组小管数目分别为8.14±1.25、12.76±0.79和18.46±0.72(P<0.01),小管长度分别为98.56±3.71、105.17±1.34和151.62±2.51(P<0.05)。结论:VEGF-C基因真核表达载体构建成功,VEGF-C基因促进胃癌细胞增殖、克隆形成和小管形成。
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