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土壤微生物群落多样性在保证作物健康生长、提高土壤质量、实现农业可持续发展等方面都具有十分重要的意义，研究方法的选择尤为关键，T-RFLP技术因其能快速获得大量数据、灵敏度高且稳定性好，近年来广泛应用于土壤微生物多样性研究中，本文从原理方法、重要环节及实际应用3个方面介绍T-RFLP技术，分析其局限性，并对其应用前景进行展望，旨在为土壤微生物群落分析研究提供更可靠、高效的方法。