【摘 要】
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目的建立一种简便、快速的登革病毒核酸检测方法。方法设计合成LNA探针,替代MGB探针,建立一步法TaqMan RT-PCR方法,并用已知的登革病毒标准毒株进行方法的优化;用商品化的纯
【机 构】
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广东检验检疫技术中心卫生检疫实验室; 云浮出入境检验检疫局 广东广州510700; 广东广州510700;
【基金项目】
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2005年度国家质检总局科技计划项目(编号2005IK-079)
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目的建立一种简便、快速的登革病毒核酸检测方法。方法设计合成LNA探针,替代MGB探针,建立一步法TaqMan RT-PCR方法,并用已知的登革病毒标准毒株进行方法的优化;用商品化的纯化试剂盒和简单的热释放法获取登革病毒细胞培养液和模拟含登革病毒血清中RNA,以优化的TaqMan RT-PCR方法进行检测,比较有或无RNA纯化步骤检测的敏感性和重复性。结果LNA探针TaqMan RT-PCR有较好的PCR扩增效率(104%)、较广的线性范围(100~10-7样品稀释度)、较高的敏感性(0.003 TCID50/反应)和较好的重复性(CV值小于4.53%),新方法检测经简单热释放RNA的细胞培养液和模拟含登革病毒血清中登革病毒也有较高的敏感性(0.03TCID50/反应)和较好的重复性(CV值小于6.36%)。结论新型LNA探针可替代MGB探针用于TaqMan RT-PCR反应,简便的热释放RNA方法结合高敏感性的TaqMan RT-PCR可满足登革病毒快速检测的需要。
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