目的建立密闭式连续循环培养系统以制备大肠埃希菌生物膜,探讨不同培养时间对其形成的影响。方法运用菌落计数测定及扫描电镜观察生物膜内大肠埃希活细菌量及生物膜的变化。结果 3次建模测定的第5、7、10 d的实际菌落计数分别为(1.72±2.14)×105、(1.18±1.32)×105、(5.45±6.84)×104CFU/cm2,生物膜细菌平均标准菌落计数分别为(4.98±0.47)、(4.82±0.46)、(4.43±0.52)lg CFU/cm2,总体差异有统计学意义(F=5.10,P=0.01),第5、7 d比较差异无统计学意义,两者分别与第10 d比较,差异均有统计学意义(P<0.05);扫描电镜观察,持续灌流5 d的Teflon管腔内表面,生物膜细菌间粘丝样胞外基质形成并交联呈网状,细菌紧密黏附;灌流7 d,胞外多聚物基质黏附单个细胞形成微生物菌落;灌流10 d则形成稳定成熟的生物膜。结论大肠埃希菌在Teflon管内表面生物膜的形成与培养时间有密切关系,随着时间延长,生物膜细菌量逐渐减少,形成了成熟稳定的生物膜。