目的探讨黄芪多糖通过DNA损伤修复发挥抗非小细胞肺癌（NSCLC）活性的作用及机制。方法通过ip氨基甲酸酯（0.8 mg/g）建立NSCLC小鼠模型,观察肺组织表面结节的数量及形态在体评价黄芪多糖（300 mg/kg）的抗肿瘤活性;CCK8法评价黄芪多糖体外抗人NSCLC细胞系A549（40.00、20.00、10.00、5.00、2.50、1.25μmol/L）和HCC827（100、50、25μmol/L）增殖活性;并通过单细胞凝胶电泳测定（彗星试验）评价黄芪多糖对A549（40μmol/L）和HCC827（50μmol/L）细胞DNA损伤的影响;通过实时荧光定量PCR（RT-qPCR）、Western blotting、RNA干扰、免疫荧光染色实验研究黄芪多糖对VRK1/P53BP1信号通路的作用。结果与模型组小鼠比较,黄芪多糖和吉非替尼（阳性药）组的结节数目显著减少（P<0.05、0.01）;黄芪多糖组的肿瘤结节呈近似圆形,与紧密排列的肿瘤结节边界清晰,模型和吉非替尼组的结节呈现不规则结构,细胞排列松散,更具侵略性。黄芪多糖呈剂量相关性地抑制A549和HCC827细胞增殖,显著缩短的彗尾和橄榄炬（P<0.05、0.001）,保护DNA完整性;显著增加NSCLC细胞中VRK1 mRNA和蛋白表达水平（P<0.05、0.01）,同时免疫荧光分析发现P53BP1和VRK1蛋白表达水平升高,且VRK1蛋白可在细胞核和细胞质之间移位;通过VRK1敲低反向验证上述结果。结论黄芪多糖通过激活VRK1/P53BP1信号转导途径增强DNA损伤修复,进而抑制NSCLC细胞增殖。