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目的
利用真核毕赤酵母高效表达原核的耐辐射奇球菌pprI基因，建立高效表达及纯化PprI蛋白质的技术路线。
方法根据毕赤酵母密码子的偏爱性，改造耐辐射奇球菌pprI基因的编码序列，利用PCR技术全合成改造过的pprI基因，并在其N末端添加一个6×His标签。PCR产物经纯化后克隆到毕赤酵母表达载体pHBM-905A中，利用Cop I和Not I双酶切并回收线性化的目的片段后，转化毕赤酵母GS115菌株。将获得的毕赤酵母转化子诱导表达，SDS-PAGE、Western blot和质谱检测培养上清液，用Ni-NTA柱纯化目的蛋白，BCA法测定蛋白浓度。
结果新合成的耐辐射奇球菌pprI基因编码序列正确，毕赤酵母转化菌株的培养上清液经SDS-PAGE和Western blot均可检测到相对分子质量为43 000的目的蛋白条带，经质谱检测证实该目的蛋白为耐辐射奇球菌PprI蛋白。选用Ni-NTA柱获得了大量纯化的PprI蛋白，应用浓度为250 mmol/L的咪唑淋洗时，PprI蛋白洗脱率最高。BCA法测得纯化蛋白浓度为0.35 mg/ml。
结论建立了一种新的适于毕赤酵母表达的耐辐射奇球菌pprI基因，成功构建了分泌表达PprI蛋白质的重组毕赤酵母工程菌株，建立了高效表达目的蛋白的技术路线，并获得了高效表达和纯化的PprI蛋白。