论文部分内容阅读
目的:探讨携带凋亡素基因(apopptin)的溶瘤腺病毒ATV感染对人宫颈癌HeLa细胞自噬和凋亡的影响。方法:分别用携带凋亡素基因的溶瘤腺病毒ATV与对照病毒Ad-MOCK(均为前期工作构建)感染HeLa细胞后,应用WST-1法检测ATV感染对HeLa细胞增殖的影响,流式细胞术检测ATV感染对HeLa细胞凋亡和细胞周期的影响,Western blotting法检测ATV感染对HeLa细胞自噬相关蛋白LC3、P62与mTOR表达的影响,MDC染色法检测ATV感染对HeLa细胞自噬水平的影响。结果:ATV感染后抑制HeLa细胞增殖,并具有一定的时间效应关系;以ATV 100 MOI感染72 h后抑制率达到59.26%,其抑制能力明显强于同时间段对照组(P<0.01)。ATV感染48 h,ATV组HeLa细胞凋亡率显著高于对照组[(38.995±4.009)%vs(14.680±1.174)%,P<0.01]。感染后的HeLa细胞,随着ATV作用时间的延长,S期出现阻滞,48 h阻滞最强,显著高于对照组[(58.490±2.447)%vs(43.235±4.419)%,P<0.05]。与对照组相比,ATV感染HeLa后,LC3表达量6、12 h逐渐增高,12 h达到最大值(P<0.01),24 h表达量最低(P<0.01);P62蛋白在24 h出现最高表达水平(P<0.01);而mTOR随着作用时间延长逐渐降低(48 h时,P<0.01)。荧光显微镜下可见HeLa细胞核周区域MDC阳性染色,随着ATV作用时间延长,自噬小体明显增多;与对照组相比,6、12h自噬小体数量显著增多[(28.000±2.828)vs(8.500±2.121),(37.000±4.243)vs(14.000±1.414);均P<0.01],24 h相对减少[(12.000±2.828)vs(17.000±1.414),P<0.01]。结论:携带凋亡素基因的ATV溶瘤腺病毒可促进人宫颈癌HeLa细胞的凋亡和自噬水平,进而特异性杀伤肿瘤细胞。