【摘 要】
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目的 筛选出能高效抑制骨肉瘤细胞株MG63中人EAG1(hEAG1)基因表达的短发卡RNA (shRNA).方法 根据人EAG1信使RNA (mRNA)的序列,设计合成4对不同的且能干扰hEAG1基因表达的shRN
【机 构】
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厦门大学附属东南医院骨科,厦门大学附属东南医院内分泌科
【基金项目】
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解放军南京军区科技创基金资助项目;
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目的 筛选出能高效抑制骨肉瘤细胞株MG63中人EAG1(hEAG1)基因表达的短发卡RNA (shRNA).方法 根据人EAG1信使RNA (mRNA)的序列,设计合成4对不同的且能干扰hEAG1基因表达的shRNA.利用同源重组技术构建pGeneSil-hEAG1干扰载体,经酶切及测序鉴定后体外转染MG63细胞.采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白印迹法(Western blot)分别检测hEAG1 mRNA和蛋白的表达.结果 成功合成4对shRNA.细胞转染结果显示48 h后实验组和对照组均有强荧光表达,转染率为70％.pGeneSil-hEAG1-2组的干扰效果最为明显,hEAG1 mRNA和蛋白表达较对照组明显下调,与其他组之间差异有统计学意义(P＜0.05).结论 成功筛选出的shRNA可高效阻断hEAG1的表达,可能成为骨肉瘤靶向性治疗的新策略.
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