【摘 要】
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目的扩增和克隆TTV-ORF1 DNA,构建原核表达载体并在大肠杆菌表达.方法从TTV病毒感染者外周血中提取DNA,用PCR从中扩增出TTV-ORF1 DNA,插入载体pGEM-T Easy中;测序正确后,克隆
【机 构】
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郑州大学第一附属医院,郑州大学基础医学院,郑州市武警消防支队卫生队
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目的扩增和克隆TTV-ORF1 DNA,构建原核表达载体并在大肠杆菌表达.方法从TTV病毒感染者外周血中提取DNA,用PCR从中扩增出TTV-ORF1 DNA,插入载体pGEM-T Easy中;测序正确后,克隆至原核表达载体pGEX-4T-1中,构建重组表达载体pGEX-4T-1-ORF1,转化大肠杆菌BL21株进行表达.结果成功获得TTV-ORF1编码基因并构建原核表达载体,测序结果与GenBank收录序列相一致.诱导表达得到51kD的TTV-ORF1融合蛋白,占细菌总蛋白量的27.2%.Western
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