【摘 要】
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目的 探讨PA2146基因对铜绿假单胞菌毒力及宿主免疫应答的影响.方法 采用实时荧光定量PCR检测铜绿假单胞菌在被膜菌和浮游菌两种状态下PA2146基因的表达差异.采用发光免疫分
【机 构】
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中南大学湘雅三医院检验科,湖南长沙,410013
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目的 探讨PA2146基因对铜绿假单胞菌毒力及宿主免疫应答的影响.方法 采用实时荧光定量PCR检测铜绿假单胞菌在被膜菌和浮游菌两种状态下PA2146基因的表达差异.采用发光免疫分析法检测PA2146基因对铜绿假单胞菌刺激人类中性粒细胞释放IL-6的作用,最后建立小鼠急性肌肉感染模型,检测PA2146基因对铜绿假单胞菌毒力和致病力的影响. 结果 铜绿假单胞菌被膜状态时PA2146基因的表达显著高于其浮游状态,与浮游状态相比,孵育8h后生物膜中PA2146基因的表达量增高(3.35±0.099)倍(t=41.15,P＜0.01);孵育16 h增高(8.03±0.28)倍(t=44.14,P＜0.01);同时,青脓素检测试验和细胞试验也分别证实PA2146基因敲除后铜绿假单胞菌分泌青脓素的能力增强并抑制人类中性粒细胞IL-6的释放,PA2146敲除株组IL-6的分泌量为(25.44±4.14)pg/ml,野生型组为(63.89±4.22)pg/ml,差异有统计学意义(t=6.504,P＜0.05).此外,小鼠急性肌肉感染模型证实PA2146基因敲除后铜绿假单胞菌的毒力增强,注射PA2146敲除株的小鼠中间生存期为16h,野生型PAO1感染组为46 h,差异有统计学意义(x2=28.18,P＜0.01);感染12 h后△PA2146组小鼠大腿肌肉的载菌量为(3.71±0.17)×109 CFU/g,PAO1组为(6.25±0.98)×105 CFU/g,差异有统计学意义(t=5.149,P＜0.01). 结论 PA2146基因可抑制铜绿假单胞菌青脓素的分泌和增强铜绿假单胞菌的致病力.
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