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摘要 [目的] 建立黄瓜和土壤中醚菌酯残留检测方法。[方法]用乙腈提取黄瓜和土壤样品，经弗罗里硅柱净化后用气相色谱ECD检测器检测。[结果] 在醚菌酯添加水平为0.05、0.20、0.50 mg/kg 3个浓度时， 黄瓜中回收率为80.2%～114.0%，变异系数为2.1%～5.8%；土壤中回收率为95.1%～106.5%，变异系数为3.1%～7.3%，醚菌酯的最小检出量为2.5×10-2 ng，最低检出浓度为2.5 μg/kg。[结论]该方法灵敏度高、检测限低、重现性好，完全能够满足黄瓜和土壤中醚菌酯残留的检测要求。
关键词 30%醚菌酯悬浮剂；黄瓜；土壤；残留检测
中图分类号 S481+.8 文献标识码
A 文章编号 0517-6611（2014）20-06690-02
Determination of Kresoximmethyl Residues in Cucumber and Soil by Capillary Gas Chromatography
GE Qian， GOU Chunlin et al （Quality Standard and Technique Institute of Agricultural Products， Ningxia Academy of Agriculture and Forestry， Yinchuan， Ningxia 750002）
Abstract [Objective] The aim was to develop a method to determine kresoximmethyl residues in cucumber and soil. [Method] The cucumber and soil samples were extracted by acetonitrile， and then detected by capillarygas chromatography after florisilphase
extraction. [Result] Under the addition level of 0.05， 0.20， 0.50 mg/kg， the recovery rates of kresoximmethyl in cucumber and soil samples were 80.2%-114.0%， 95.1%-106.5% with RSD of 2.1%-5.8% and 3.1%-7.3% respectively. The LOQ and LOD were 2.5×10-2 ng and 2.5 μg/kg. [Conclusion] This method was sensitive with low detectable limitation and good precision， which could be perfectly adopted in determining the kresoximmethyl residues in cucumber and soil.
Key words 30% kresoximmethyl suspensions； Cucumber； Soil； Residue detection
醚菌酯[1-3]是一種高效、广谱、新型杀菌剂。它对半知菌、子囊菌、担子菌、卵菌纲等真菌引起的多种病害具有很好的活性，如葡萄白粉病、小麦锈病、马铃薯疫病、南瓜疫病、水稻稻瘟病等病害。醚菌酯不仅具有广谱的杀菌活性，同时具有良好的保护和治疗作用，与其他常用的杀菌剂无交互抗性，且比常规杀菌剂持效期长。其具有高度的选择性，对作物、人畜及有益生物安全，对环境基本无污染。有关其残留分析方法，常用的有气相色谱法（GC）[4-7]、液相色谱法（LC）[8]、气相色谱-质谱联用法（GCMS）[9-10]、高效液相色谱-串联质谱法（HPLCMS/MS）[11]等。现阶段对黄瓜中醚菌酯残留量检测前处理主要以丙酮、二氯甲烷为主，其毒害性大，并且丙酮易挥发，从而影响检测灵敏度。为此，笔者研究了醚菌酯在黄瓜和土壤中残留分析的样品前处理和气相色谱检测条件，以期为醚菌酯在黄瓜上合理使用和制定 《农药安全使用标准》 提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 仪器。
Agilent 6890N气相色谱仪，配ECD检测器，美国安捷伦公司生产；
T18basic型高速匀浆机，德国IKA公司生产； K600组织捣碎机，吉列布朗公司生产；MS3 digital漩涡混匀器，德国IKA公司生产；电子天平（精度0.01 g），梅特勒-托利多集团生产；R15型旋转蒸发器，瑞士步琪公司生产；TD40L型离心机，上海安亭科学仪器厂生产；
DHG9240A型电热鼓风干燥箱，上海一恒科学仪器有限公司生产。
1.1.2 试剂。醚菌酯标准品：纯度98.0%，由德国DR公司提供；乙腈：色谱纯；石油醚：分析纯；正己烷：色谱纯；丙酮：色谱纯；去离子水；氯化钠：分析纯，140 ℃烘烤4 h；无水硫酸钠：分析纯，550 ℃高温干燥；弗罗里硅土（60～100目）：550 ℃活化，4%蒸馏水灭活；弗罗里硅柱：玻璃层析柱底部塞棉花，按1 cm无水硫酸钠、3 cm弗罗里硅土、1 cm无水硫酸钠分别装入填料，备用。
1.2 方法
1.2.1 提取。
1.2.1.1 黄瓜样品。
称取10 g试样（精确到0.01 g）于50 ml离心管中，加入20.0 ml乙腈，用均质器以15 000 r/min匀浆提取1 min，加入5 g已烘烤的氯化钠，摇匀，将离心管放入离心机，在3 000 r/min下离心5 min，取上清液10.0 ml于浓缩瓶中（相当于5 g试样量），待净化。 1.2.1.2 土壤样品。
称取5 g试样（精确到0.01 g）于50 ml离心管中，加入20.0 ml乙腈，室温振荡1 h，加入5 g干燥过的氯化钠，摇匀，将离心管放入离心机，在3 000 r/min下离心5 min，取上清液10.0 ml于浓缩瓶中（相当于2.5 g试样量），待净化。
1.2.2 净化。将盛有上清液的浓缩瓶置于旋转蒸发仪上，35 ℃水浴，蒸发近干，加入2.5 ml丙酮+石油醚（10+90）待净化。将弗罗里硅柱用10 ml石油醚预淋洗，条件化，当溶剂液面到达吸附层表面时，立即倒入上述待净化溶液，用浓缩瓶接受洗脱液，用丙酮+石油醚（10+90）冲洗浓缩瓶后淋洗弗罗里硅柱，并重复1次。将盛有淋洗液的浓缩瓶置于旋转蒸发仪上，在水浴温度35 ℃条件下蒸发至干。用正己烷定容至5.0 ml，在旋涡混合器上混匀，待测。
1.2.3 仪器分析条件。色谱柱：DB35MS色谱柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）；模式：不分流；载气：N2；加热器：290 ℃；压力：27.41 Psi；总流量：101 ml/min；流量：3.2 ml/min；平均线速度：59 cm/s；柱箱温度：60～300 ℃；尾吹气流量：N2，60 ml/min；进样量：1.0 μl。在上述条件下，醚菌酯保留时间约为10.6 min（图1）。
图1 0.5 mg/kg醚菌酯标样色谱
2 结果与分析
2.1 标准曲线
將1.0 mg/ml醚菌酯标准溶液用正己烷稀释配成0.02、0.05、0.10、0.20、1.00、2.00 mg/L系列标准溶液，在“1.2.3”液相色谱条件下进行测定，以醚菌酯标准溶液浓度与峰面积作标准曲线。标样线性方程为：y=36 703x-255.95，相关系数（r）为0.999 8，其中y为醚菌酯峰面积，x为标准溶液浓度（图2）。
图2 醚菌酯标准工作曲线
2.2 最低检出量与最低检出浓度
根据添加回收率试验，在“1.2.3”色谱条件下醚菌酯在黄瓜中的最低检出量为2.5×10-3ng，最低检出浓度为2.5 μg/kg，土壤中为2.4 μg/kg，保留时间约为10.6 min。
2.3 添加回收率与相对标准偏差
分别在空白黄瓜和土壤样品中添加0.05、0.20、0.50 mg/kg 3个浓度的醚菌酯标准溶液，5次重复，按“1.2.3”色谱分析条件测定回收率。由表1可知，黄瓜中醚菌酯回收率为80.2%～114.0%，变异系数为2.1%～5.8%；土壤中回收率为95.1%～106.5%，变异系数为3.1%～7.3%，且黄瓜和土壤杂质峰对醚菌酯的检测无影响 （图 3～ 4）， 说明该方法的准确度和精确度均符合醚菌酯残留检测的要求。
3 结论
试验建立的黄瓜和土壤中醚菌酯残留检测方法，前处理简便，检测方法精密度和准确度较好，线性范围较宽，添加回收率高，不同水平的添加回收率波动小，方法的检出限低，可准确、快速地检测出黄瓜及土壤中醚菌酯的残留量。
参考文献
[1]
赵善欢.植物化学保护[M].北京： 中国农业出版社，1999：73.
[2] 徐德进，金旻琦，顾中言，等.毒死蜱在水稻害虫防治中的应用概述[J].现代药，2007，6（2）：6-9.
[3] 刘乾开. 新编农药使用手册[M].上海：上海科学技术出版社，1993：84-86.
[4] 吴宪，李建中，胡继业，等.GC法检测醚菌酯在黄瓜中的残留[J].环境化学，2005，25（4）：485.
[5] 陈长龙，李建中，吴宪，等.气相色谱法测定醚菌酯在黄瓜和土壤中的残留量[J].农药学学报，2006，8（2）：191-194.
[6] 章虎，叶蓓蓓，王祥云，等.气相色谱法测定番茄、黄瓜中醚菌酯和肟菌酯残留[J].化学通报，2008（6）：465-468.
[7] 周凤霞，陈存.气相色谱法同时测定蔬菜中醚菌酯和肟菌酯残留量的方法研究[J].农业环境与发展，2009（4）：81-84.
[8] DE MELO ABREU S，CABONI P，CABRAS P，et al.Validation and global uncertainty of a liquid chromatographic with diodearray detection method for the screening of azoxystrobin，kresoximmethyl，trifloxystrobin，amoxadone，pyraclostrobinand fenamidone in grapes and wine[J].Analytica Chimica Acta，2006，573-574，291-297.
[9] NAVAL A，PRIETO A，ARAUJO L，et al.Determination of pyrimethanil And kresoximmethyl in green groceries by headspace solidphase microextraction andgas chromatographymass spectrometry[J].J Chromatogra A，2002，975（2）：355-360.
[10] NAVAL N A，PRIETO A，ARAUJO L，et al.Determination of pyrimethanil and kresoximmethyl in soils by headspace solidphase microextraction and gas chromatographymass spectrometry[J].Anal Bioanal Chem，2004，379（7/8）：1100-1105.
[11] 王云凤，葛宝坤，高建会，等.液相色谱-质谱法测定果蔬中八种甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂残留量[J].食品研究与开发，2009，30（4）：130-132.
关键词 30%醚菌酯悬浮剂；黄瓜；土壤；残留检测
中图分类号 S481+.8 文献标识码
A 文章编号 0517-6611（2014）20-06690-02
Determination of Kresoximmethyl Residues in Cucumber and Soil by Capillary Gas Chromatography
GE Qian， GOU Chunlin et al （Quality Standard and Technique Institute of Agricultural Products， Ningxia Academy of Agriculture and Forestry， Yinchuan， Ningxia 750002）
Abstract [Objective] The aim was to develop a method to determine kresoximmethyl residues in cucumber and soil. [Method] The cucumber and soil samples were extracted by acetonitrile， and then detected by capillarygas chromatography after florisilphase
extraction. [Result] Under the addition level of 0.05， 0.20， 0.50 mg/kg， the recovery rates of kresoximmethyl in cucumber and soil samples were 80.2%-114.0%， 95.1%-106.5% with RSD of 2.1%-5.8% and 3.1%-7.3% respectively. The LOQ and LOD were 2.5×10-2 ng and 2.5 μg/kg. [Conclusion] This method was sensitive with low detectable limitation and good precision， which could be perfectly adopted in determining the kresoximmethyl residues in cucumber and soil.
Key words 30% kresoximmethyl suspensions； Cucumber； Soil； Residue detection
醚菌酯[1-3]是一種高效、广谱、新型杀菌剂。它对半知菌、子囊菌、担子菌、卵菌纲等真菌引起的多种病害具有很好的活性，如葡萄白粉病、小麦锈病、马铃薯疫病、南瓜疫病、水稻稻瘟病等病害。醚菌酯不仅具有广谱的杀菌活性，同时具有良好的保护和治疗作用，与其他常用的杀菌剂无交互抗性，且比常规杀菌剂持效期长。其具有高度的选择性，对作物、人畜及有益生物安全，对环境基本无污染。有关其残留分析方法，常用的有气相色谱法（GC）[4-7]、液相色谱法（LC）[8]、气相色谱-质谱联用法（GCMS）[9-10]、高效液相色谱-串联质谱法（HPLCMS/MS）[11]等。现阶段对黄瓜中醚菌酯残留量检测前处理主要以丙酮、二氯甲烷为主，其毒害性大，并且丙酮易挥发，从而影响检测灵敏度。为此，笔者研究了醚菌酯在黄瓜和土壤中残留分析的样品前处理和气相色谱检测条件，以期为醚菌酯在黄瓜上合理使用和制定 《农药安全使用标准》 提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 仪器。
Agilent 6890N气相色谱仪，配ECD检测器，美国安捷伦公司生产；
T18basic型高速匀浆机，德国IKA公司生产； K600组织捣碎机，吉列布朗公司生产；MS3 digital漩涡混匀器，德国IKA公司生产；电子天平（精度0.01 g），梅特勒-托利多集团生产；R15型旋转蒸发器，瑞士步琪公司生产；TD40L型离心机，上海安亭科学仪器厂生产；
DHG9240A型电热鼓风干燥箱，上海一恒科学仪器有限公司生产。
1.1.2 试剂。醚菌酯标准品：纯度98.0%，由德国DR公司提供；乙腈：色谱纯；石油醚：分析纯；正己烷：色谱纯；丙酮：色谱纯；去离子水；氯化钠：分析纯，140 ℃烘烤4 h；无水硫酸钠：分析纯，550 ℃高温干燥；弗罗里硅土（60～100目）：550 ℃活化，4%蒸馏水灭活；弗罗里硅柱：玻璃层析柱底部塞棉花，按1 cm无水硫酸钠、3 cm弗罗里硅土、1 cm无水硫酸钠分别装入填料，备用。
1.2 方法
1.2.1 提取。
1.2.1.1 黄瓜样品。
称取10 g试样（精确到0.01 g）于50 ml离心管中，加入20.0 ml乙腈，用均质器以15 000 r/min匀浆提取1 min，加入5 g已烘烤的氯化钠，摇匀，将离心管放入离心机，在3 000 r/min下离心5 min，取上清液10.0 ml于浓缩瓶中（相当于5 g试样量），待净化。 1.2.1.2 土壤样品。
称取5 g试样（精确到0.01 g）于50 ml离心管中，加入20.0 ml乙腈，室温振荡1 h，加入5 g干燥过的氯化钠，摇匀，将离心管放入离心机，在3 000 r/min下离心5 min，取上清液10.0 ml于浓缩瓶中（相当于2.5 g试样量），待净化。
1.2.2 净化。将盛有上清液的浓缩瓶置于旋转蒸发仪上，35 ℃水浴，蒸发近干，加入2.5 ml丙酮+石油醚（10+90）待净化。将弗罗里硅柱用10 ml石油醚预淋洗，条件化，当溶剂液面到达吸附层表面时，立即倒入上述待净化溶液，用浓缩瓶接受洗脱液，用丙酮+石油醚（10+90）冲洗浓缩瓶后淋洗弗罗里硅柱，并重复1次。将盛有淋洗液的浓缩瓶置于旋转蒸发仪上，在水浴温度35 ℃条件下蒸发至干。用正己烷定容至5.0 ml，在旋涡混合器上混匀，待测。
1.2.3 仪器分析条件。色谱柱：DB35MS色谱柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）；模式：不分流；载气：N2；加热器：290 ℃；压力：27.41 Psi；总流量：101 ml/min；流量：3.2 ml/min；平均线速度：59 cm/s；柱箱温度：60～300 ℃；尾吹气流量：N2，60 ml/min；进样量：1.0 μl。在上述条件下，醚菌酯保留时间约为10.6 min（图1）。
图1 0.5 mg/kg醚菌酯标样色谱
2 结果与分析
2.1 标准曲线
將1.0 mg/ml醚菌酯标准溶液用正己烷稀释配成0.02、0.05、0.10、0.20、1.00、2.00 mg/L系列标准溶液，在“1.2.3”液相色谱条件下进行测定，以醚菌酯标准溶液浓度与峰面积作标准曲线。标样线性方程为：y=36 703x-255.95，相关系数（r）为0.999 8，其中y为醚菌酯峰面积，x为标准溶液浓度（图2）。
图2 醚菌酯标准工作曲线
2.2 最低检出量与最低检出浓度
根据添加回收率试验，在“1.2.3”色谱条件下醚菌酯在黄瓜中的最低检出量为2.5×10-3ng，最低检出浓度为2.5 μg/kg，土壤中为2.4 μg/kg，保留时间约为10.6 min。
2.3 添加回收率与相对标准偏差
分别在空白黄瓜和土壤样品中添加0.05、0.20、0.50 mg/kg 3个浓度的醚菌酯标准溶液，5次重复，按“1.2.3”色谱分析条件测定回收率。由表1可知，黄瓜中醚菌酯回收率为80.2%～114.0%，变异系数为2.1%～5.8%；土壤中回收率为95.1%～106.5%，变异系数为3.1%～7.3%，且黄瓜和土壤杂质峰对醚菌酯的检测无影响 （图 3～ 4）， 说明该方法的准确度和精确度均符合醚菌酯残留检测的要求。
3 结论
试验建立的黄瓜和土壤中醚菌酯残留检测方法，前处理简便，检测方法精密度和准确度较好，线性范围较宽，添加回收率高，不同水平的添加回收率波动小，方法的检出限低，可准确、快速地检测出黄瓜及土壤中醚菌酯的残留量。
参考文献
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[6] 章虎，叶蓓蓓，王祥云，等.气相色谱法测定番茄、黄瓜中醚菌酯和肟菌酯残留[J].化学通报，2008（6）：465-468.
[7] 周凤霞，陈存.气相色谱法同时测定蔬菜中醚菌酯和肟菌酯残留量的方法研究[J].农业环境与发展，2009（4）：81-84.
[8] DE MELO ABREU S，CABONI P，CABRAS P，et al.Validation and global uncertainty of a liquid chromatographic with diodearray detection method for the screening of azoxystrobin，kresoximmethyl，trifloxystrobin，amoxadone，pyraclostrobinand fenamidone in grapes and wine[J].Analytica Chimica Acta，2006，573-574，291-297.
[9] NAVAL A，PRIETO A，ARAUJO L，et al.Determination of pyrimethanil And kresoximmethyl in green groceries by headspace solidphase microextraction andgas chromatographymass spectrometry[J].J Chromatogra A，2002，975（2）：355-360.
[10] NAVAL N A，PRIETO A，ARAUJO L，et al.Determination of pyrimethanil and kresoximmethyl in soils by headspace solidphase microextraction and gas chromatographymass spectrometry[J].Anal Bioanal Chem，2004，379（7/8）：1100-1105.
[11] 王云凤，葛宝坤，高建会，等.液相色谱-质谱法测定果蔬中八种甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂残留量[J].食品研究与开发，2009，30（4）：130-132.