【摘 要】
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首次用花生半胚作为外植体,与农杆菌EHA105(含质粒p1301HBs)共培养5 d,再生培养基中通过加入潮霉素进行抗性筛选,得到抗潮霉素的芽,经芽的伸长、诱导生根获得转化植株.经PCR
【机 构】
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厦门大学细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室
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首次用花生半胚作为外植体,与农杆菌EHA105(含质粒p1301HBs)共培养5 d,再生培养基中通过加入潮霉素进行抗性筛选,得到抗潮霉素的芽,经芽的伸长、诱导生根获得转化植株.经PCR、PCR-Southern杂交、Southern点杂交等分子检测,证实目的基因已整合到花生基因组中,ELISA检测证实了在花生中表达的HBsAg具有较好的活性.经初步定量,花生小芽的蛋白初提液中可溶性蛋白含量1.044 g/L,HBsAg小蛋白的含量约占总可溶性蛋白的0.032%,每克转化植株小芽鲜重含HBsAg小蛋白约2.4×10-7 g.转基因花生植株初提重组蛋白经HPLC纯化、浓缩后,注射初免一次的小鼠,有明显的特异性抗体产生.口服饲喂已免疫但抗体下降至0.025(HBsAb ELISA D值)Balb/c小鼠,发现有较强的抗体回升,达3.54,表明转基因花生疫苗可以加强口服免疫.
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