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摘要[目的]采用 HPLC建立同时测定栀子金花丸中黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素这4种成分含量的分析方法
关键词栀子金花丸；HPLC；黄芩苷；汉黄芩苷；黄芩素；汉黄芩素
中图分类号S567文献标识码A文章编号0517-6611（2014）06-01605-02
Abstract[Objective] To establish a method for the simultaneous determination of Baicalin， Wogonoside， Baicalein and Wogonin in Zhizijinhua Pill using HPLC. [Method] The separation was carried out on a Agilent Zorbax SB-C_（18）（4.6 mm×250 mm， 5μm）. The mobile phase was methanol-0.1% phosphoric acid with gradient elution and 278nm wavelength detection. [Result] The Baicalin， Wogonoside， Baicalein， Wogonin had good linearity in the ranges of 0.418-4.18 μg/ml（R=0.999 8）， 0.2-2 μg/ml（R=0.999 8）， 0.233-2330 μg/ml（R=0.999 9） and 0.215-2.150 μg/ml（R=0.999 9）. The average recoveries were 98.40%（RSD=0.45%）， 98.66%（RSD=141%）， 98.88%（RSD=1.48%）， 98.97%（RSD=1.45%）， respectively. [Conclusion] This method is rapid， simple with good repeatability and recovery， so it can be used as a quantitative analysis method for Zhizijinhua Pill.
Key wordsZhizijinhua Pill； HPLC； Baicalin； Wogonoside； Baicalein； Wogonin
栀子金花丸由栀子（FRUCTUS GARDENIAE）、黄芩（RADIX SCUTELLARIAE）、黄连（RHIZOMA COPTIDIS）等8味中药组成，具有凉血解毒和清热泻火等功效，主要用于治疗口舌生疮、牙龈肿痛、咽喉肿痛和目赤眩晕等。栀子金花丸中栀子和黄芩是其君药，其中栀子具有泻火除烦、清热利湿和凉血解毒等功效[1]；黄芩具有清热燥湿、泻火解毒和止血安胎等功效[2]。目前，很多文献对栀子金花丸的质量控制，但多是单独测定栀子苷和黄芩苷，而黄芩苷不能全面反映黄芩中有效成分的药效，且黄芩又是栀子金花丸中的君药，其有效成分的含量标准直接影响着栀子金花丸的疗效。因此，笔者采用HPLC法测定栀子金花丸中4种主要有效成分的含量，以期为进一步完善栀子金花丸的质量标准提供奠定基础。
1材料与方法
1.1材料
1.1.1研究对象。栀子金花丸，由攀枝花市人民医院药剂科提供。
1.1.2主要仪器。Agilent Zorbax SB-C18安捷伦高效液相色谱仪，购自Agilent公司；BSA-224S赛多利斯电子天平，购自赛多利斯公司；JAC超声波清洗器，购自上海君翼有限公司，功率250 W，频率25 kHz。
1.1.3主要试剂。黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素对照品，均由中国药品生物制品检定所提供，对照品的纯度均>98%；乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯，市售；水是重蒸馏水，实验室自制。
1.2方法
1.2.1色谱条件。色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相为乙腈-浓度0.1%磷酸，梯度洗脱：0 min→20 min→50 min，乙腈5%→15%→45%；检测波长为278 nm；流速为1.0 ml/min；柱温为30 ℃；进样量为10 μl。
1.2.2对照品溶液的制备。分别取黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素对照品适量，用电子天平精密称定，置棕色容量瓶，加浓度50%甲醇制成1 ml含黄芩苷0.209 mg、汉黄芩苷0.1 mg、黄芩素0.116 5 mg、汉黄芩素0.107 5 mg的混合溶液，即得。
1.2.3供试品溶液的制备。精密称取2.002 6 g栀子金花丸细粉，置具塞锥形瓶中，精密加入50 ml浓度50%甲醇溶液，称定重量，超声处理30 min，取出，放冷，再称定重量，用浓度50%甲醇补足减失重量，摇匀并过滤，即得。
1.2.4方法学考察。（1）系统适应性试验。分别精密吸取上述对照品溶液和供试品溶液各10 μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。（2）线性关系的考察。分别精密吸取 “122”项下对照品溶液2.5、5.0、7.5、10.0、15.0、20.0和25.0 μl，注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，再以峰面积A对进样量C（μg）进行回归，计算标准曲线方程。（3）精密度试验。分别精密吸取“1.2.2”项下混合对照品溶液10 μl，连续进样6次，计算黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素峰面积的RSD。（4）重复性试验。取同一批样品，按“123”项下方法，平行制备6份供试品溶液，分别进样测定并计算黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素平均含量的RSD。（5）稳定性试验。分别取适量供试品溶液，于制备后0、2、4、8、12和24 h内进样测定，计算黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素及汉黄芩素峰面积的RSD。（6）加样回收试验。精密称取已知含量的栀子金花丸粉末9份，每份0.500 0 g，分成3组，每组各3份，分别精密添加含黄芩苷0.208 mg/ml，汉黄芩苷0100 mg/ml，黄芩素0.116 6 mg/ml及汉黄芩素 0.107 8 mg/ml的混合对照品溶液2、3和4 ml，分别按照“1.2.3”项下的方法制备供试品溶液，按照上述色谱条件测定并计算平均回收率和RSD。
3结论与讨论
在试验中，针对含量测定配制供试品溶液时，采用不同提取方法（超声、回流及索氏提取），且用不同提取溶剂（水、25%甲醇、50%甲醇、75%甲醇）和不同溶剂体积（10、25、50和75 ml）以及不同提取时间（15、30、45和60 min）分别作考察。结果发现，以50 ml浓度50%甲醇超声提取30 min含量最高，杂质峰较少。试验建立了同时测定中成药栀子金花丸中4种有效成分的HPLC标准，方法准确，可靠，可以为此中成药的指纹图谱提供有效参考，同时为其质量标准的规范提供科学依据。
参考文献
[1] 药典委员会.中国药典（一部）.2010年版[S].北京：化学工业出版社，2010：231-232.
[2] 黄燕萍，黄焜.HPLC法同时测定栀子金花丸中栀子苷和黄芩苷的含量[J].中国药事，2010，24（10）：1002-1004.
[3] 劉元媛，卢静华，郭伟英，等.栀子金花丸中黄芩苷的含量测定[J].辽宁医学院学报，2011，32（4）：357-359.
[4] 左银风.HPLC同时测定栀子金花丸中栀子苷和黄芩苷的含量[J].新疆医学，2011，41（1）：137-140.
[5] 林辉.HPLC 法测定栀子金花丸中黄芩苷的含量[J].海峡药学，2010，24（11）：79-80.
[6] 田智勇，于培明，许启泰.中药栀子的研究进展[J].时珍国医国药，2004，15（11）：782-785.
[7] 邬晓鸥，鲁静.高效液相色谱法测定栀子中绿原酸的含量[J].中国中药杂志，1996，21（10）：620-621.
关键词栀子金花丸；HPLC；黄芩苷；汉黄芩苷；黄芩素；汉黄芩素
中图分类号S567文献标识码A文章编号0517-6611（2014）06-01605-02
Abstract[Objective] To establish a method for the simultaneous determination of Baicalin， Wogonoside， Baicalein and Wogonin in Zhizijinhua Pill using HPLC. [Method] The separation was carried out on a Agilent Zorbax SB-C_（18）（4.6 mm×250 mm， 5μm）. The mobile phase was methanol-0.1% phosphoric acid with gradient elution and 278nm wavelength detection. [Result] The Baicalin， Wogonoside， Baicalein， Wogonin had good linearity in the ranges of 0.418-4.18 μg/ml（R=0.999 8）， 0.2-2 μg/ml（R=0.999 8）， 0.233-2330 μg/ml（R=0.999 9） and 0.215-2.150 μg/ml（R=0.999 9）. The average recoveries were 98.40%（RSD=0.45%）， 98.66%（RSD=141%）， 98.88%（RSD=1.48%）， 98.97%（RSD=1.45%）， respectively. [Conclusion] This method is rapid， simple with good repeatability and recovery， so it can be used as a quantitative analysis method for Zhizijinhua Pill.
Key wordsZhizijinhua Pill； HPLC； Baicalin； Wogonoside； Baicalein； Wogonin
栀子金花丸由栀子（FRUCTUS GARDENIAE）、黄芩（RADIX SCUTELLARIAE）、黄连（RHIZOMA COPTIDIS）等8味中药组成，具有凉血解毒和清热泻火等功效，主要用于治疗口舌生疮、牙龈肿痛、咽喉肿痛和目赤眩晕等。栀子金花丸中栀子和黄芩是其君药，其中栀子具有泻火除烦、清热利湿和凉血解毒等功效[1]；黄芩具有清热燥湿、泻火解毒和止血安胎等功效[2]。目前，很多文献对栀子金花丸的质量控制，但多是单独测定栀子苷和黄芩苷，而黄芩苷不能全面反映黄芩中有效成分的药效，且黄芩又是栀子金花丸中的君药，其有效成分的含量标准直接影响着栀子金花丸的疗效。因此，笔者采用HPLC法测定栀子金花丸中4种主要有效成分的含量，以期为进一步完善栀子金花丸的质量标准提供奠定基础。
1材料与方法
1.1材料
1.1.1研究对象。栀子金花丸，由攀枝花市人民医院药剂科提供。
1.1.2主要仪器。Agilent Zorbax SB-C18安捷伦高效液相色谱仪，购自Agilent公司；BSA-224S赛多利斯电子天平，购自赛多利斯公司；JAC超声波清洗器，购自上海君翼有限公司，功率250 W，频率25 kHz。
1.1.3主要试剂。黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素对照品，均由中国药品生物制品检定所提供，对照品的纯度均>98%；乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯，市售；水是重蒸馏水，实验室自制。
1.2方法
1.2.1色谱条件。色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相为乙腈-浓度0.1%磷酸，梯度洗脱：0 min→20 min→50 min，乙腈5%→15%→45%；检测波长为278 nm；流速为1.0 ml/min；柱温为30 ℃；进样量为10 μl。
1.2.2对照品溶液的制备。分别取黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素对照品适量，用电子天平精密称定，置棕色容量瓶，加浓度50%甲醇制成1 ml含黄芩苷0.209 mg、汉黄芩苷0.1 mg、黄芩素0.116 5 mg、汉黄芩素0.107 5 mg的混合溶液，即得。
1.2.3供试品溶液的制备。精密称取2.002 6 g栀子金花丸细粉，置具塞锥形瓶中，精密加入50 ml浓度50%甲醇溶液，称定重量，超声处理30 min，取出，放冷，再称定重量，用浓度50%甲醇补足减失重量，摇匀并过滤，即得。
1.2.4方法学考察。（1）系统适应性试验。分别精密吸取上述对照品溶液和供试品溶液各10 μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。（2）线性关系的考察。分别精密吸取 “122”项下对照品溶液2.5、5.0、7.5、10.0、15.0、20.0和25.0 μl，注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，再以峰面积A对进样量C（μg）进行回归，计算标准曲线方程。（3）精密度试验。分别精密吸取“1.2.2”项下混合对照品溶液10 μl，连续进样6次，计算黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素峰面积的RSD。（4）重复性试验。取同一批样品，按“123”项下方法，平行制备6份供试品溶液，分别进样测定并计算黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素平均含量的RSD。（5）稳定性试验。分别取适量供试品溶液，于制备后0、2、4、8、12和24 h内进样测定，计算黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素及汉黄芩素峰面积的RSD。（6）加样回收试验。精密称取已知含量的栀子金花丸粉末9份，每份0.500 0 g，分成3组，每组各3份，分别精密添加含黄芩苷0.208 mg/ml，汉黄芩苷0100 mg/ml，黄芩素0.116 6 mg/ml及汉黄芩素 0.107 8 mg/ml的混合对照品溶液2、3和4 ml，分别按照“1.2.3”项下的方法制备供试品溶液，按照上述色谱条件测定并计算平均回收率和RSD。
3结论与讨论
在试验中，针对含量测定配制供试品溶液时，采用不同提取方法（超声、回流及索氏提取），且用不同提取溶剂（水、25%甲醇、50%甲醇、75%甲醇）和不同溶剂体积（10、25、50和75 ml）以及不同提取时间（15、30、45和60 min）分别作考察。结果发现，以50 ml浓度50%甲醇超声提取30 min含量最高，杂质峰较少。试验建立了同时测定中成药栀子金花丸中4种有效成分的HPLC标准，方法准确，可靠，可以为此中成药的指纹图谱提供有效参考，同时为其质量标准的规范提供科学依据。
参考文献
[1] 药典委员会.中国药典（一部）.2010年版[S].北京：化学工业出版社，2010：231-232.
[2] 黄燕萍，黄焜.HPLC法同时测定栀子金花丸中栀子苷和黄芩苷的含量[J].中国药事，2010，24（10）：1002-1004.
[3] 劉元媛，卢静华，郭伟英，等.栀子金花丸中黄芩苷的含量测定[J].辽宁医学院学报，2011，32（4）：357-359.
[4] 左银风.HPLC同时测定栀子金花丸中栀子苷和黄芩苷的含量[J].新疆医学，2011，41（1）：137-140.
[5] 林辉.HPLC 法测定栀子金花丸中黄芩苷的含量[J].海峡药学，2010，24（11）：79-80.
[6] 田智勇，于培明，许启泰.中药栀子的研究进展[J].时珍国医国药，2004，15（11）：782-785.
[7] 邬晓鸥，鲁静.高效液相色谱法测定栀子中绿原酸的含量[J].中国中药杂志，1996，21（10）：620-621.