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摘要[目的]采用 HPLC建立同时测定栀子金花丸中黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素这4种成分含量的分析方法
关键词栀子金花丸;HPLC;黄芩苷;汉黄芩苷;黄芩素;汉黄芩素
中图分类号S567文献标识码A文章编号0517-6611(2014)06-01605-02
Abstract[Objective] To establish a method for the simultaneous determination of Baicalin, Wogonoside, Baicalein and Wogonin in Zhizijinhua Pill using HPLC. [Method] The separation was carried out on a Agilent Zorbax SB-C_(18)(4.6 mm×250 mm, 5μm). The mobile phase was methanol-0.1% phosphoric acid with gradient elution and 278nm wavelength detection. [Result] The Baicalin, Wogonoside, Baicalein, Wogonin had good linearity in the ranges of 0.418-4.18 μg/ml(R=0.999 8), 0.2-2 μg/ml(R=0.999 8), 0.233-2330 μg/ml(R=0.999 9) and 0.215-2.150 μg/ml(R=0.999 9). The average recoveries were 98.40%(RSD=0.45%), 98.66%(RSD=141%), 98.88%(RSD=1.48%), 98.97%(RSD=1.45%), respectively. [Conclusion] This method is rapid, simple with good repeatability and recovery, so it can be used as a quantitative analysis method for Zhizijinhua Pill.
Key wordsZhizijinhua Pill; HPLC; Baicalin; Wogonoside; Baicalein; Wogonin
栀子金花丸由栀子(FRUCTUS GARDENIAE)、黄芩(RADIX SCUTELLARIAE)、黄连(RHIZOMA COPTIDIS)等8味中药组成,具有凉血解毒和清热泻火等功效,主要用于治疗口舌生疮、牙龈肿痛、咽喉肿痛和目赤眩晕等。栀子金花丸中栀子和黄芩是其君药,其中栀子具有泻火除烦、清热利湿和凉血解毒等功效[1];黄芩具有清热燥湿、泻火解毒和止血安胎等功效[2]。目前,很多文献对栀子金花丸的质量控制,但多是单独测定栀子苷和黄芩苷,而黄芩苷不能全面反映黄芩中有效成分的药效,且黄芩又是栀子金花丸中的君药,其有效成分的含量标准直接影响着栀子金花丸的疗效。因此,笔者采用HPLC法测定栀子金花丸中4种主要有效成分的含量,以期为进一步完善栀子金花丸的质量标准提供奠定基础。
1材料与方法
1.1材料
1.1.1研究对象。栀子金花丸,由攀枝花市人民医院药剂科提供。
1.1.2主要仪器。Agilent Zorbax SB-C18安捷伦高效液相色谱仪,购自Agilent公司;BSA-224S赛多利斯电子天平,购自赛多利斯公司;JAC超声波清洗器,购自上海君翼有限公司,功率250 W,频率25 kHz。
1.1.3主要试剂。黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素对照品,均由中国药品生物制品检定所提供,对照品的纯度均>98%;乙腈为色谱纯,其余试剂均为分析纯,市售;水是重蒸馏水,实验室自制。
1.2方法
1.2.1色谱条件。色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相为乙腈-浓度0.1%磷酸,梯度洗脱:0 min→20 min→50 min,乙腈5%→15%→45%;检测波长为278 nm;流速为1.0 ml/min;柱温为30 ℃;进样量为10 μl。
1.2.2对照品溶液的制备。分别取黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素对照品适量,用电子天平精密称定,置棕色容量瓶,加浓度50%甲醇制成1 ml含黄芩苷0.209 mg、汉黄芩苷0.1 mg、黄芩素0.116 5 mg、汉黄芩素0.107 5 mg的混合溶液,即得。
1.2.3供试品溶液的制备。精密称取2.002 6 g栀子金花丸细粉,置具塞锥形瓶中,精密加入50 ml浓度50%甲醇溶液,称定重量,超声处理30 min,取出,放冷,再称定重量,用浓度50%甲醇补足减失重量,摇匀并过滤,即得。
1.2.4方法学考察。(1)系统适应性试验。分别精密吸取上述对照品溶液和供试品溶液各10 μl,注入高效液相色谱仪,记录色谱图。(2)线性关系的考察。分别精密吸取 “122”项下对照品溶液2.5、5.0、7.5、10.0、15.0、20.0和25.0 μl,注入高效液相色谱仪,按上述色谱条件测定峰面积,再以峰面积A对进样量C(μg)进行回归,计算标准曲线方程。(3)精密度试验。分别精密吸取“1.2.2”项下混合对照品溶液10 μl,连续进样6次,计算黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素峰面积的RSD。(4)重复性试验。取同一批样品,按“123”项下方法,平行制备6份供试品溶液,分别进样测定并计算黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素平均含量的RSD。(5)稳定性试验。分别取适量供试品溶液,于制备后0、2、4、8、12和24 h内进样测定,计算黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素及汉黄芩素峰面积的RSD。(6)加样回收试验。精密称取已知含量的栀子金花丸粉末9份,每份0.500 0 g,分成3组,每组各3份,分别精密添加含黄芩苷0.208 mg/ml,汉黄芩苷0100 mg/ml,黄芩素0.116 6 mg/ml及汉黄芩素 0.107 8 mg/ml的混合对照品溶液2、3和4 ml,分别按照“1.2.3”项下的方法制备供试品溶液,按照上述色谱条件测定并计算平均回收率和RSD。
3结论与讨论
在试验中,针对含量测定配制供试品溶液时,采用不同提取方法(超声、回流及索氏提取),且用不同提取溶剂(水、25%甲醇、50%甲醇、75%甲醇)和不同溶剂体积(10、25、50和75 ml)以及不同提取时间(15、30、45和60 min)分别作考察。结果发现,以50 ml浓度50%甲醇超声提取30 min含量最高,杂质峰较少。试验建立了同时测定中成药栀子金花丸中4种有效成分的HPLC标准,方法准确,可靠,可以为此中成药的指纹图谱提供有效参考,同时为其质量标准的规范提供科学依据。
参考文献
[1] 药典委员会.中国药典(一部).2010年版[S].北京:化学工业出版社,2010:231-232.
[2] 黄燕萍,黄焜.HPLC法同时测定栀子金花丸中栀子苷和黄芩苷的含量[J].中国药事,2010,24(10):1002-1004.
[3] 劉元媛,卢静华,郭伟英,等.栀子金花丸中黄芩苷的含量测定[J].辽宁医学院学报,2011,32(4):357-359.
[4] 左银风.HPLC同时测定栀子金花丸中栀子苷和黄芩苷的含量[J].新疆医学,2011,41(1):137-140.
[5] 林辉.HPLC 法测定栀子金花丸中黄芩苷的含量[J].海峡药学,2010,24(11):79-80.
[6] 田智勇,于培明,许启泰.中药栀子的研究进展[J].时珍国医国药,2004,15(11):782-785.
[7] 邬晓鸥,鲁静.高效液相色谱法测定栀子中绿原酸的含量[J].中国中药杂志,1996,21(10):620-621.
关键词栀子金花丸;HPLC;黄芩苷;汉黄芩苷;黄芩素;汉黄芩素
中图分类号S567文献标识码A文章编号0517-6611(2014)06-01605-02
Abstract[Objective] To establish a method for the simultaneous determination of Baicalin, Wogonoside, Baicalein and Wogonin in Zhizijinhua Pill using HPLC. [Method] The separation was carried out on a Agilent Zorbax SB-C_(18)(4.6 mm×250 mm, 5μm). The mobile phase was methanol-0.1% phosphoric acid with gradient elution and 278nm wavelength detection. [Result] The Baicalin, Wogonoside, Baicalein, Wogonin had good linearity in the ranges of 0.418-4.18 μg/ml(R=0.999 8), 0.2-2 μg/ml(R=0.999 8), 0.233-2330 μg/ml(R=0.999 9) and 0.215-2.150 μg/ml(R=0.999 9). The average recoveries were 98.40%(RSD=0.45%), 98.66%(RSD=141%), 98.88%(RSD=1.48%), 98.97%(RSD=1.45%), respectively. [Conclusion] This method is rapid, simple with good repeatability and recovery, so it can be used as a quantitative analysis method for Zhizijinhua Pill.
Key wordsZhizijinhua Pill; HPLC; Baicalin; Wogonoside; Baicalein; Wogonin
栀子金花丸由栀子(FRUCTUS GARDENIAE)、黄芩(RADIX SCUTELLARIAE)、黄连(RHIZOMA COPTIDIS)等8味中药组成,具有凉血解毒和清热泻火等功效,主要用于治疗口舌生疮、牙龈肿痛、咽喉肿痛和目赤眩晕等。栀子金花丸中栀子和黄芩是其君药,其中栀子具有泻火除烦、清热利湿和凉血解毒等功效[1];黄芩具有清热燥湿、泻火解毒和止血安胎等功效[2]。目前,很多文献对栀子金花丸的质量控制,但多是单独测定栀子苷和黄芩苷,而黄芩苷不能全面反映黄芩中有效成分的药效,且黄芩又是栀子金花丸中的君药,其有效成分的含量标准直接影响着栀子金花丸的疗效。因此,笔者采用HPLC法测定栀子金花丸中4种主要有效成分的含量,以期为进一步完善栀子金花丸的质量标准提供奠定基础。
1材料与方法
1.1材料
1.1.1研究对象。栀子金花丸,由攀枝花市人民医院药剂科提供。
1.1.2主要仪器。Agilent Zorbax SB-C18安捷伦高效液相色谱仪,购自Agilent公司;BSA-224S赛多利斯电子天平,购自赛多利斯公司;JAC超声波清洗器,购自上海君翼有限公司,功率250 W,频率25 kHz。
1.1.3主要试剂。黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素对照品,均由中国药品生物制品检定所提供,对照品的纯度均>98%;乙腈为色谱纯,其余试剂均为分析纯,市售;水是重蒸馏水,实验室自制。
1.2方法
1.2.1色谱条件。色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相为乙腈-浓度0.1%磷酸,梯度洗脱:0 min→20 min→50 min,乙腈5%→15%→45%;检测波长为278 nm;流速为1.0 ml/min;柱温为30 ℃;进样量为10 μl。
1.2.2对照品溶液的制备。分别取黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素对照品适量,用电子天平精密称定,置棕色容量瓶,加浓度50%甲醇制成1 ml含黄芩苷0.209 mg、汉黄芩苷0.1 mg、黄芩素0.116 5 mg、汉黄芩素0.107 5 mg的混合溶液,即得。
1.2.3供试品溶液的制备。精密称取2.002 6 g栀子金花丸细粉,置具塞锥形瓶中,精密加入50 ml浓度50%甲醇溶液,称定重量,超声处理30 min,取出,放冷,再称定重量,用浓度50%甲醇补足减失重量,摇匀并过滤,即得。
1.2.4方法学考察。(1)系统适应性试验。分别精密吸取上述对照品溶液和供试品溶液各10 μl,注入高效液相色谱仪,记录色谱图。(2)线性关系的考察。分别精密吸取 “122”项下对照品溶液2.5、5.0、7.5、10.0、15.0、20.0和25.0 μl,注入高效液相色谱仪,按上述色谱条件测定峰面积,再以峰面积A对进样量C(μg)进行回归,计算标准曲线方程。(3)精密度试验。分别精密吸取“1.2.2”项下混合对照品溶液10 μl,连续进样6次,计算黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素峰面积的RSD。(4)重复性试验。取同一批样品,按“123”项下方法,平行制备6份供试品溶液,分别进样测定并计算黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素平均含量的RSD。(5)稳定性试验。分别取适量供试品溶液,于制备后0、2、4、8、12和24 h内进样测定,计算黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素及汉黄芩素峰面积的RSD。(6)加样回收试验。精密称取已知含量的栀子金花丸粉末9份,每份0.500 0 g,分成3组,每组各3份,分别精密添加含黄芩苷0.208 mg/ml,汉黄芩苷0100 mg/ml,黄芩素0.116 6 mg/ml及汉黄芩素 0.107 8 mg/ml的混合对照品溶液2、3和4 ml,分别按照“1.2.3”项下的方法制备供试品溶液,按照上述色谱条件测定并计算平均回收率和RSD。
3结论与讨论
在试验中,针对含量测定配制供试品溶液时,采用不同提取方法(超声、回流及索氏提取),且用不同提取溶剂(水、25%甲醇、50%甲醇、75%甲醇)和不同溶剂体积(10、25、50和75 ml)以及不同提取时间(15、30、45和60 min)分别作考察。结果发现,以50 ml浓度50%甲醇超声提取30 min含量最高,杂质峰较少。试验建立了同时测定中成药栀子金花丸中4种有效成分的HPLC标准,方法准确,可靠,可以为此中成药的指纹图谱提供有效参考,同时为其质量标准的规范提供科学依据。
参考文献
[1] 药典委员会.中国药典(一部).2010年版[S].北京:化学工业出版社,2010:231-232.
[2] 黄燕萍,黄焜.HPLC法同时测定栀子金花丸中栀子苷和黄芩苷的含量[J].中国药事,2010,24(10):1002-1004.
[3] 劉元媛,卢静华,郭伟英,等.栀子金花丸中黄芩苷的含量测定[J].辽宁医学院学报,2011,32(4):357-359.
[4] 左银风.HPLC同时测定栀子金花丸中栀子苷和黄芩苷的含量[J].新疆医学,2011,41(1):137-140.
[5] 林辉.HPLC 法测定栀子金花丸中黄芩苷的含量[J].海峡药学,2010,24(11):79-80.
[6] 田智勇,于培明,许启泰.中药栀子的研究进展[J].时珍国医国药,2004,15(11):782-785.
[7] 邬晓鸥,鲁静.高效液相色谱法测定栀子中绿原酸的含量[J].中国中药杂志,1996,21(10):620-621.