【摘 要】
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将菠菜乙醇酸氧化酶基因片段克隆至表达载体pPIC3.5k.提取重组质粒,进行限制性酶切鉴定.重组质粒用Sal I酶切线性化,电导入法转化毕赤酵母(Pichia pastoris),在缺乏组氨酸的R
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将菠菜乙醇酸氧化酶基因片段克隆至表达载体pPIC3.5k.提取重组质粒,进行限制性酶切鉴定.重组质粒用Sal I酶切线性化,电导入法转化毕赤酵母(Pichia pastoris),在缺乏组氨酸的RDB平板筛选重组子,提取酵母的染色体基因组进行PCR扩增鉴定整合情况,用甲醇诱导表达.结果表明,Sds-PAGE电泳显示表达蛋白的分子量约为39.8 kD,与文献报道的乙醇酸氧化酶分子量接近.酶的活力达到了40.8 IU/g湿菌体,比不含有目的片断的对照菌酶活提高了17倍,确认了导入的乙醇酸氧化酶基因片段在酵母中
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