【摘 要】
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目的构建蜕皮素诱导的抑癌基因ndr2哺乳动物真核表达载体(pIND-ndr2),转染肺腺癌细胞GLC-82,观察ndr2基因表达,为进一步研究ndr2的生物学功能打下基础. 方法以RT-PCR方法确定
【机 构】
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第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室,陕西,西安,710033；第四军医大学西京医院呼吸内科,陕西,西安,710033第四军医大学西京医院超声诊断科,陕西,西安,710033;第四军医大学西京
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目的构建蜕皮素诱导的抑癌基因ndr2哺乳动物真核表达载体(pIND-ndr2),转染肺腺癌细胞GLC-82,观察ndr2基因表达,为进一步研究ndr2的生物学功能打下基础. 方法以RT-PCR方法确定正常人肺组织和肺腺癌GLC-82细胞ndr2的表达高低. PCR方法扩增ndr2, 以BamHI+EcoRI双酶切连接入pUC19载体中,测序正确后,插入到蜕皮素诱导的真核表达载体pIND中. 连有ndr2基因的载体(pIND-ndr2)用脂质体方法转染到培养的肺腺癌细胞GLC-82中. 经G418和zeocin双抗生素筛选后,挑取单克隆进行培养,用蜕皮素诱导ndr2表达,用RT-PCR,western印迹和免疫组织化学方法验证获得表达的细胞株. 结果 PCR的方法扩增获得大小约1200 bp的片段,连接入预先插入HA-tag的pUC19载体的ndr2基因经HindⅢ+EcoRI酶切后,构建到真核表达载体pIND中,酶切鉴定后证明连接片段正确. 通过双载体转染和双抗生素筛选后,培养的细胞经诱导后检测到实验组ndr2的高表达,而对照组和未诱导的实验组ndr2表达均较低. 结论 ndr2基因成功转染培养的肺腺癌GLC-82细胞,建立了ndr2的可诱导表达的细胞系.
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