【摘 要】
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[目的]本研究构建禽致病性大肠杆菌(avian pathogenic Escherichia coli,APEC)ygeG基因缺失株,并对其进行生物学特性及致病性分析,探究ygeG在APEC致病过程中的作用,为后期深入研究其所在的Ⅲ型分泌系统2(type three secretion systems 2,ETT2)毒力岛的致病机制奠定基础.[方法]利用Red同源重组技术构建ygeG缺失株APEC81-ΔyygeG及其回复株APEC81-CΔygeG,通过运动性、生物被膜形成能力、抗逆性、抗血清杀菌能力等
【机 构】
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安徽农业大学动物科技学院兽医病理生物学与疫病防控安徽省重点实验室,安徽合肥230036
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[目的]本研究构建禽致病性大肠杆菌(avian pathogenic Escherichia coli,APEC)ygeG基因缺失株,并对其进行生物学特性及致病性分析,探究ygeG在APEC致病过程中的作用,为后期深入研究其所在的Ⅲ型分泌系统2(type three secretion systems 2,ETT2)毒力岛的致病机制奠定基础.[方法]利用Red同源重组技术构建ygeG缺失株APEC81-ΔyygeG及其回复株APEC81-CΔygeG,通过运动性、生物被膜形成能力、抗逆性、抗血清杀菌能力等试验分析yygeG对APEC致病性相关的生物学功能的影响,并通过细胞黏附、侵袭试验及荧光定量PCR检测细胞炎性因子转录水平探究ygeG对APEC感染宿主过程的影响.[结果]成功构建了缺失株APEC81-ΔyygeG和回复株APEC81-CΔygeG;与野生株APEC81相比,缺失株APEC81-ΔygeG生长特性无显著变化(P＞0.05),生物被膜形成能力显著降低(P＜0.01),运动能力极显著升高(P＜0.001),对酸休克和氧化休克的耐受力极显著降低(P＜0.001),对碱、渗透压和热休克的耐受力显著降低(P＜0.01);血清杀菌实验表明,ygeG缺失能显著降低其抗血清杀菌作用(P＜0.0l),血清浓度为100％、30％时,差异极显著(P＜0.001);与野生株APEC81相比,缺失株APEC81-ΔygeG对鸡气管粘膜上皮细胞的黏附能力极显著下降(P＜0.001),侵袭能力显著升高(P＜0.01);同时,经APEC81-ΔygeG感染的鸡气管粘膜上皮细胞炎性因子转录水平显著升高(P＜0.01).[结论]ygeG影响APEC的生物被膜形成、运动性、抗逆性、黏附侵袭能力、以及对血清的敏感性等,并可抑制细胞炎性因子表达.
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