【摘 要】
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目的:探讨Wnt/β-catenin信号通路在骨关节炎发病中的作用,观察补肾活血方对异常的滑膜-软骨微环境的调控作用,初步阐释补肾活血方治疗骨关节炎的分子作用机制。方法:构建β-
【机 构】
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上海中医药大学附属普陀医院伤骨科,山东省威海市威海卫人民医院脊柱外科,
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目的:探讨Wnt/β-catenin信号通路在骨关节炎发病中的作用,观察补肾活血方对异常的滑膜-软骨微环境的调控作用,初步阐释补肾活血方治疗骨关节炎的分子作用机制。方法:构建β-catenin过表达慢病毒载体转染正常人滑膜细胞,Transwell小室共培养人滑膜细胞与正常人软骨细胞模拟滑膜软骨关节体系内环境;各时间点不同浓度药物干预共培养体系,Western bolt方法检测补肾活血方对滑膜细胞β-catenin蛋白表达的影响;ELISA方法检测补肾活血方对共培养体系中滑膜细胞、软骨细胞培养上清液基质金属蛋白酶-7(MMP-7),人Ⅱ型胶原交联羧基端肽(CTX-Ⅱ),软骨寡聚基质蛋白(COMP)表达的影响。结果:Western blot检测发现β-catenin过表达慢病毒转染正常人滑膜细胞后滑膜细胞胞浆及胞核中β-catenin表达明显上调(P<0.01),补肾活血方能够明显下调共培养滑膜细胞中β-catenin蛋白的表达(P<0.01);同时,ELISA法检测发现补肾活血方能够明显下调滑膜细胞与软骨细胞培养上清液中MMP-7,CTX-Ⅱ,COMP的表达(P<0.01)。结论:β-catenin过表达慢病毒转染正常人滑膜细胞可成功激活Wnt/β-catenin信号通路,Wnt/β-catenin信号通路激活后共培养体系中MMP-7,CTX-Ⅱ,COMP的水平明显上升;补肾活血方可以抑制滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路,下调共培养体系中MMP-7,CTX-Ⅱ,COMP的表达,减轻异常滑膜细胞对软骨细胞的损害,减缓软骨基质的降解,有利于骨关节炎的缓解和恢复。
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