【摘 要】
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目的:构建多基因表达载体,在大肠杆菌中同时表达AFP单链抗体(sc Fv)和蓝藻别藻蓝蛋白α亚基脱辅基蛋白(apc A)组成的融合蛋白(sc Fv-apc A)、藻胆蛋白裂合酶(cpc S)及藻红蛋
【机 构】
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中国科学院海洋研究所实验海洋生物学重点实验室; 青岛海洋科学与技术国家实验室海洋生物学与生物技术功能实验室; 中国科学院大学;
【基金项目】
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国家“863”计划(2014AA093505;2014AA093501);国家海洋公益性行业科研专项经费项目(201205027-2);国家自然科学基金(41276164)资助项目
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目的:构建多基因表达载体,在大肠杆菌中同时表达AFP单链抗体(sc Fv)和蓝藻别藻蓝蛋白α亚基脱辅基蛋白(apc A)组成的融合蛋白(sc Fv-apc A)、藻胆蛋白裂合酶(cpc S)及藻红蛋白生物合成酶(Ho1和peb S),获得共价结合藻红胆素的融合蛋白(sc Fv-apc A-PEB)。方法:利用融合PCR将sc Fv和apc A基因连接起来,形成sc Fv-apc A融合基因,并将该融合基因与cpc S克隆到表达载体p CDFDuet-1中;将Ho1和peb S基因克隆到表达载体pRSFDuet-1中。将两种载体共转化到大肠杆菌中,IPTG诱导重组蛋白表达,经亲和层析获得重组蛋白,通过光谱学分析和抗体竞争性抑制法,测定重组蛋白的生物学活性。结果:成功表达融合蛋白sc Fv-apc A-PEB,分子质量约为45k Da,与理论值相符,其最大吸收峰为549.5nm,最大荧光发射峰为560nm,竞争抑制ELISA法初步鉴定活性,竞争抑制率达到48%。结论:利用大肠杆菌表达系统,获得了同时具有荧光特性和免疫学活性的重组蛋白。
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