【摘 要】
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目的 在系统性硬化症(《systemic sclerosis,SSc》)中探讨miR-21对SSc-ILD肺泡M1型巨噬细胞的影响并初步探究其相关分子机制.方法 首先利用ELISA检测SSc-ILD患者血清中miR-21的表达,然后利用博莱霉素(bleomycin)诱导SSc-ILD小鼠模型,将40只C57BL/6J小鼠分为4组(n=10):对照组(PBS+ antagomir NC)、对照+miR-21拮抗剂组(PBS+ miR-21 antagomir)、系统性硬化-间质性肺病+antagomir N
【机 构】
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200082,上海中医药大学附属上海市中西医结合医院临床医学院
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目的 在系统性硬化症(《systemic sclerosis,SSc》)中探讨miR-21对SSc-ILD肺泡M1型巨噬细胞的影响并初步探究其相关分子机制.方法 首先利用ELISA检测SSc-ILD患者血清中miR-21的表达,然后利用博莱霉素(bleomycin)诱导SSc-ILD小鼠模型,将40只C57BL/6J小鼠分为4组(n=10):对照组(PBS+ antagomir NC)、对照+miR-21拮抗剂组(PBS+ miR-21 antagomir)、系统性硬化-间质性肺病+antagomir NC组(SSc-ILD+ antagomir NC)、SSc-ILD+miR-21拮抗剂组(SSc-ILD+ miR-21 antagomir).在造模第28天后处死各组小鼠并收集肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)及双肺组织,利用HE染色来探究在小鼠体内抑制miR-21对博莱霉素介导的SSc-ILD的肺组织结构、肺泡灌洗液中炎性因子的表达及纤维化的影响;分离小鼠原代肺泡巨噬细胞(AMs),免疫磁珠分选M1型AMs,利用RT-PCR检测M1型表型特征分子标记基因iNOS的表达水平;生物信息学筛选IL-6作为miR-21的潜在靶基因,利用双荧光素酶基因报告实验进行检测;利用RT-PCR检测抑制miR-21后的SSc-ILD小鼠M1型AMs中miR-21与IL-6 mRNA的表达;应用Western blot实验在M1型AMs中检测IL-6和JAK/STAT信号通路中p-STAT、STAT、JAK、p-JAK蛋白的表达.结果 miR-21在SSc-ILD患者和小鼠模型中均显著上调.HE染色和RT-PCR的检测结果表明,在SSc-ILD小鼠模型中,抑制miR-21可明显缓解SSc-ILD小鼠肺部病理学改变,降低BALF中促炎因子IL-1p、TNF-α的分泌水平,增加抗炎因子IL-10的分泌;在M1和AMs中,RT-PCR实验结果显示,抑制miR-21可抑制M1表型特征分子iNOS mRNA表达水平;双荧光素酶基因报告实验结果显示,在小鼠M1型AMs中miR-21可靶向调控IL-6 mRNA的表达.Western blot实验结果显示,抑制miR-21可明显抑制SSc-ILD小鼠的M1型AMs中IL-6及JAK/STAT信号通路蛋白表达.结论 抑制miR-21可以负向调控IL-6并通过JAK/STAT信号通路来抑制SSc-ILD小鼠的肺泡M1型巨噬细胞激活,从而减轻肺部的炎症反应抑制系统性硬化症.
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