目的：探究梗阻性黄疸患者胆汁标本中的病原菌分布及其耐药情况，为临床早期制定抗菌方案提供参考。方法：选取2019年1月—2021年10月医院收治的148例梗阻性黄疸患者作为研究对象，采集所有患者胆汁标本进行病原菌培养和药敏试验，统计梗阻性黄疸患者胆汁标本中的病原菌分布及其耐药情况。结果：148份胆汁标本共分离出139株病原菌，其中革兰阴性菌107株（占76.98%，主要为大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和弗氏枸橼酸杆菌）、革兰阳性菌27株（占19.42%，主要为粪肠球菌、凝固酶阴性葡萄球菌和金黄色葡萄球菌）、真菌5株（占3.60%）；大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和弗氏枸橼酸杆菌对亚胺培南、美罗培南的耐药率较低（＜5.00%），对氨苄西林、左氧氟沙星的耐药率较高（＞50.00%）；粪肠球菌、凝固酶阴性葡萄球菌和金黄色葡萄球菌对万古霉素、利奈唑胺的耐药率较低（＜5.00%），对红霉素、环丙沙星、青霉素的耐药率较高（＞60.00%）。结论：梗阻性黄疸患者胆汁标本中病原菌以革兰阴性菌为主，革兰阳性菌次之，有少量真菌感染，革兰阴性菌、革兰阳性菌对常用抗菌药物呈普遍耐药，临床需结合药敏试验结果针对性制订抗菌方案，以尽早控制患者感染症状。