目的 检测细胞外钙离子(Ca2+)浓度对高剪切力诱导血小板聚集的影响,并测定高剪切力活化血小板时血小板内Ca2+浓度的变化,探讨Ca2+在剪切力活化血小板中的作用.方法用锥板黏度计施加高剪切力作用,以荧光抗体CD61 PerCP标记血小板,流式细胞术(FCM)测定血小板聚集率.以荧光染料Fluo-3 AM标记血小板,FCM测定高剪切力作用后血小板内Ca2+浓度;并测定二磷酸腺苷(ADP)对高剪切力作用下Ca2+反应的影响.结果洗涤全血标本或加入钙离子螯合剂乙二醇四乙酸(EGTA),造成细胞外低钙或无钙环境,高剪切力诱导的血小板聚集率由59.6%±5.1%下降到很低水平,而加入外源性Ca2+在一定程度上增强这种聚集.全血标本受到高剪切力作用,血小板内Ca2+浓度发生明显的升高;增加细胞外Ca2+浓度能增强这种反应,降低细胞外Ca2+浓度或阻断血小板膜糖蛋白GPⅠb/Ⅸ与血浆血管假性血友病因子(vWF)之间的相互作用,使血小板Ca2+反应消失,而阻断GPⅡb/Ⅲa与血浆vWF之间的相互作用则无明显影响.低浓度的ADP与高剪切力对血小板钙离子反应有协同作用.结论细胞外Ca2+是高剪切力诱导血小板聚集的必需条件,血小板内Ca2+反应可能是剪切力活化血小板时信息传递的重要物质基础。