【摘 要】
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为进一步研究扁桃CBF2目的蛋白功能,探明CBF2转录因子在扁桃中的抗寒分子机制,以新疆栽培扁桃(Amygdalus communis L.)‘双软’叶片为材料,通过PCR技术从基因组DNA中克隆CBF2
【基金项目】
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国家自然科学基金“新疆扁桃耐寒基因CBF在花粉发育中的功能及其花粉发育避寒机制研究”(31360473);新疆维吾尔自治区园艺学重点学科基金项目(2016-10758-3)
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为进一步研究扁桃CBF2目的蛋白功能,探明CBF2转录因子在扁桃中的抗寒分子机制,以新疆栽培扁桃(Amygdalus communis L.)‘双软’叶片为材料,通过PCR技术从基因组DNA中克隆CBF2基因,命名为AcCBF2,将该基因片段连接到原核表达载体pET-32a(+)上,构建重组质粒pET-AcCBF2并转化E.coli Rosetta(DE3)感受态细胞中进行诱导表达;生物信息学推测显示该基因的开放阅读框(ORF)为717 bp,编码238个氨基酸,其分子量为26.59 kD,等电点为5.29。系统发育树分析结果显示,AcCBF2基因与扁桃CBF1、光核桃和桃的亲缘关系最近。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果表明,该蛋白分子量约47 kD,与预期蛋白大小基本一致。AcCBF2基因在E.coli Rosetta中的最佳诱导条件为IPTG浓度0.2 mmol/L、诱导4 h。
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