【摘 要】
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启动子是控制基因转录的重要元件,也是合成生物学研究和细胞工厂设计的关键环节.糖酵解途径和三羧酸循环是糖类分解代谢的中心代谢,受到包括启动子强度在内的严格调控.为了筛
【机 构】
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工业发酵微生物教育部重点实验室天津市工业微生物重点实验室天津科技大学生物工程学院 天津300457
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启动子是控制基因转录的重要元件,也是合成生物学研究和细胞工厂设计的关键环节.糖酵解途径和三羧酸循环是糖类分解代谢的中心代谢,受到包括启动子强度在内的严格调控.为了筛选一系列能满足合成生物学研究和细胞工厂设计需要的不同强度的内源性组成型启动子,利用报告基因——红色荧光蛋白mCherry和在线分析软件,系统研究了大肠杆菌糖酵解和三羧酸循环中27个启动子的强度和核心结构元件.结果 表明:这些启动子的强度范围变化很大,最强启动子PgapA的强度是最弱启动子PacnA强度的43.6倍;启动子的-10序列和-35序列与它们的一致序列也不完全相同,两者之间的距离为17 ±3bp;但是,启动子的强度和启动子的结构特征基本一致.应用最强启动子PgapA在重组大肠杆菌DH5α△pck中分别表达磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因和丙酮酸激酶基因,它们的酶活性分别提高了0.32和1.57倍,柠檬酸产量也提高了124.7％和75.5％.这些不同强度的启动子为大肠杆菌的合成生物学研究和细胞工厂设计奠定了一定的基础.
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