【摘 要】
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目的建立Caco-2细胞体外吸收模型并对其进行验证,以利于药物吸收转运的研究。方法 Caco-2细胞接种于Transwell 24孔微孔滤膜培养板上,培养3,6,9,12,15,18,21 d,通过观察细胞
【机 构】
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湖北省药品监督检验研究院,湖北中医药大学
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目的建立Caco-2细胞体外吸收模型并对其进行验证,以利于药物吸收转运的研究。方法 Caco-2细胞接种于Transwell 24孔微孔滤膜培养板上,培养3,6,9,12,15,18,21 d,通过观察细胞形态、绘制生长曲线、测定跨膜电阻值（TEER）,比较低、中、高细胞浓度(5×104,1×105,2×105·mL-1)对细胞单层完整性的影响,以确定细胞接种密度和培养时间;通过测定荧光黄的跨膜通透性、细胞膜顶侧（AP）、基底侧（BL）及细胞内的碱性磷酸酶活性验证细胞单层通透性和极性分化特征。结果低、中、高浓度细胞接种后分别在15,12,9 d形成单层膜结构,吸光度达高峰,但生长后期高、中浓度组细胞出现成团、死亡,且TEER值小于低浓度组。低浓度细胞接种15 d TEER值达到300Ω·cm2,15～21 d基本稳定;选择低浓度(5×104·mL-1)为合适的浓度接种细胞,培养21 d后,荧光黄的表观渗透系数（Papp）为3.57×10-7cm·s-1,低于通透实验规定的5.0×10-7cm·s-1;细胞内碱性磷酸酶活性增加,膜两侧碱性磷酸酶活性比值（AP/BL）增高5倍多,细胞形成极性分化。结论所建立的Caco-2细胞模型完整性、通透性与极性分化特征通过验证,可作为模拟小肠药物转运过程的体外模型。
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