【摘 要】
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目的利用超分支滚环扩增(hyper-rolling cycle amplification,HRCA)技术建立一种检测microRNA的方法。方法以miR-21为研究对象,设计特异的逆转录引物及锁式探针。通过对不同
【机 构】
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第三军医大学大坪医院野战外科研究所检验科; 重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学教育部重点实验室;
【基金项目】
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国家自然科学基金(81171667);重庆市科委攻关课题(CSTC2011AC5033)
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目的利用超分支滚环扩增(hyper-rolling cycle amplification,HRCA)技术建立一种检测microRNA的方法。方法以miR-21为研究对象,设计特异的逆转录引物及锁式探针。通过对不同浓度的模板及不同的microRNA进行检测来研究本方法的灵敏度和特异性。结果通过对反应条件进行优化,100 nmol/L的锁式探针在Taq DNA连接酶作用下46℃连接30 min,Bst DNA聚合酶作用下60℃反应50 min,可实现靶序列最大效率的扩增。该方法特异性好,最低检测浓度为10 pmol/L。结论 HRCA技术灵敏度高、特异性好,无需特殊昂贵的仪器,且简单易操作,能够应用于microRNA检测。
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