【摘 要】
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目的 利用生物信息学方法识别和分析曼氏迭宫绦虫异柠檬酸脱氢酶（SmNAD-IDH）核苷酸序列及生物学特征；克隆该基因并诱导蛋白表达，分析其在裂头蚴阶段的转录水平。方法 利用生物信息学在线分析工具对SmNAD-IDH基因的核苷酸序列进行识别，预测分析氨基酸序列的理化性质。分别以曼氏迭宫绦虫裂头蚴cDNA、孕节cDNA和成节cDNA作为模板PCR扩增目的基因，扩增产物与表达载体pET-30a重组后转化
【机 构】
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海南医学院热带病转化医学教育部重点实验室
【基金项目】
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国家自然科学基金项目（No.81560332）； 海南省科协青年科技英才学术创新计划项目（No.QCXM201918）； 海南省高校科学研究项目（No.SJK180005）；
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目的 利用生物信息学方法识别和分析曼氏迭宫绦虫异柠檬酸脱氢酶（SmNAD-IDH）核苷酸序列及生物学特征；克隆该基因并诱导蛋白表达，分析其在裂头蚴阶段的转录水平。方法 利用生物信息学在线分析工具对SmNAD-IDH基因的核苷酸序列进行识别，预测分析氨基酸序列的理化性质。分别以曼氏迭宫绦虫裂头蚴cDNA、孕节cDNA和成节cDNA作为模板PCR扩增目的基因，扩增产物与表达载体pET-30a重组后转化至BL21细胞中诱导蛋白表达。利用real time PCR技术分析裂头蚴阶段三羧酸循环中3个关键代谢酶的转录水平。结果 BLASTx分析SmNAD-IDH基因全长1 095 bp,编码蛋白由356个氨基酸组成。该基因与其他寄生虫同源基因核苷酸序列一致性＞70%,与人类同源基因核苷酸序列一致性为51%。该蛋白的理论等电点为6.84,分子质量为40 ku,并且氨基酸序列中无信号肽和跨膜区，为脂溶性稳定的胞内蛋白。SmNAD-IDH在裂头蚴、成节、孕节中均有表达，在裂头蚴阶段三羧酸循环中的关键酶柠檬酸合成酶、酮戊二酸脱氢酶、SmNAD-IDH均有转录，以SmNAD-IDH的转录水平较高。结论 成功重组SmNAD-IDH基因并诱导SmNAD-IDH蛋白表达，该蛋白对于曼氏迭宫绦虫，尤其是裂头蚴，是具有潜在研究价值的重要代谢酶。
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