【摘 要】
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采用RT-PCR方法克隆拟南芥硫代葡糖苷酶基因TGG1,利用毕氏酵母表达。重组蛋白用镍亲和柱纯化,获得高纯度芥子酶。重组蛋白分子量78kD,与天然TGG1分子量接近,为糖基化蛋白。TG
【机 构】
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海南大学农学院,中国热带农业科学院热带生物技术研究所
【基金项目】
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国家自然科学基金项目“新型芥子酶基因TGG4和TGG5的表达调控及生物学功能研究”（30571064）
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采用RT-PCR方法克隆拟南芥硫代葡糖苷酶基因TGG1,利用毕氏酵母表达。重组蛋白用镍亲和柱纯化,获得高纯度芥子酶。重组蛋白分子量78kD,与天然TGG1分子量接近,为糖基化蛋白。TGG1信号肽在酵母中具有分泌功能,约25%芥子酶分泌到培养基中。TGG1重组蛋白具有广泛的pH适应性,最适反应温度40℃左右。其活性被低浓度Vc激活,被高浓度Vc抑制。用Hanes plot方法计算TGG1重组蛋白,以Sinigrin为底物时,Km为65μmol/L,最大反应速率Vmax为3.28μmol/（min·
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